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INTRODUCCIÓN
El Streptococcus agalactiae o Streptococcus beta hemolítico del grupo B (SGB) es una bacteria que hace parte de la microbiota normal del recto y tracto genital humano; pertenece a la flora normal del aparato genital femenino 1 La incidencia de colonización en pacientes gestantes varía del 5 al 35 % y depende de factores como la población estudiada, el número de muestras cultivadas y la técnica de cultivo empleada 2.
Resulta de interés científico probar técnicas que permitan una mejor identificación diagnóstica que aporte a la prevención de las infecciones bacterianas de transmisión vertical 3.
Por otro lado, el Streptococcus agalatiae en un microorganismo importante cuando se analizan casos de sepsis neonatal precoz de origen bacteriano, infección neonatal y materna, desplazando al segundo lugar a la Escherichia coli. La transmisión vertical se produce en un 40 a 70 % de las pacientes con cultivos positivos para SGB3,4.
El Center for Disease Control and Prevention (CDC) estableció en 1996 dos recomendaciones para prevenir la infección neonatal por SGB: La primera, realizar cultivo de exudado rectal y vaginal en las semanas 35 a 37 de gestación para luego administrar profilaxis intraparto a todas las portadoras de SGB 5. Además, se requiere la aplicación de técnicas adecuadas en la toma de la muestra para lograr el máximo de detección de portación. Si se toma solo vaginal y no anal, se pierde gran parte de las pacientes colonizadas. 6
Teniendo en cuenta que existe variabilidad en la colonización materna, hay infecciones invasivas en neonatos por SGB, por lo tanto, se hace necesario el tamizaje, para así ofrecer profilaxis y tratamientos oportunos 7,8,9.
Sin embargo, el cultivo de exudado rectal y vaginal en las semanas 35 a 37 semanas de gestación, en pro de ampliar el rango de verdaderos positivos, puede considerarse como una prueba de tamizaje, siendo necesario incluir una prueba molecular que asegure un diagnóstico con mayor precisión, para atacar la infección en la etapa del embarazo en la mujer y prevenir infecciones graves del recién nacido por infección vertical.
En Colombia, la infección en la sangre y neumonía dentro del útero repercute en la morbimortalidad en el recién nacido. No se conoce si el SGB es el principal responsable 3,10,12.
La tipificación molecular de Streptococcus agalactiae tiene ventajas sobre las serotipificación tradicional, ya que permite identificar fuentes de infección en la enfermedad neonatal temprana y tardía; también ha sido una importante herramienta en la investigación de brotes intrahospitalarios 13. Además de resultar efectivo en el diagnóstico en mujeres gestantes portadoras.
La PCR facilita la manipulación del ADN y permite avances importantes a nivel científico 14. Es útil en ausencia de métodos alternativos o cuando estos son muy complejos, para mejorar la eficacia diagnóstica comparando con métodos convencionales si se requiere un diagnóstico rápido y precoz del agente etiológico para poder iniciar el tratamiento específico lo antes posible 15.
Fundamentado en lo anterior se precisa comprobar la eficacia de la prueba molecular PCR en tiempo real para la identificación del Streptococcus agalactiae en mujeres en la etapa final del embarazo de la ciudad de Santa Marta; lo que conduciría al fortalecimiento de acciones de protección específica en la mujer y preventivas para asegurar la sobrevivencia del recién nacido, pues es uno de los factores asociado a las infecciones neonatales.
MATERIALES Y MÉTODOS
Estudio evaluativo, que buscó determinar la eficacia de una prueba molecular para diagnosticar el Streptococcus agalactiae beta hemolítico del grupo B (SGB). Estudio con enfoque cuantitativo, diseño no experimental, llevado a cabo en una población de 100 mujeres entre 35- 37 semanas de gestación de Santa Marta asistentes a dos instituciones de salud; selección muestral probabilística correspondiente 80 participantes.
Los métodos utilizados para obtener y analizar la información consistieron en toma de muestras, previa firma del consentimiento informado y explicación minuciosa sobre el procedimiento. Las muestras vagino-rectales se tomaron con un escobillón estéril, y se colocaron en un tubo estéril 14, guardando las normas de bioseguridad. Posteriormente, los hisopados se sembraron en el medio Cromogénico (CHROMagar) orientador de Becton Dickinson, que permitió identificar las colonias sospechosas, después de incubar en aerobiosis a 37 °C durante 24 horas; las colonias sospechosas fueron identificadas fenotípicamente y sometidas a pruebas de sensibilidad mediante el equipo automatizado Phoenix™ 100.
Para el análisis molecular se utilizaron las mismas muestras, luego se identificaron en el ensayo (GBS BD MAX™). Los hisopos se inocularon en caldo Lim. Tras una incubación de 18 horas a 37 °C en aerobiosis al 5 % de CO2 ambiente, una parte alícuota de 15 ml de caldo de Lim se utilizó para detectar la presencia de SGB. La prueba incorpora la extracción de ADN para aislar el diana de ácido nucleico de la muestra y la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (PCR) para detectar la región pb de la secuencia del gen CFB del cromosoma de Streptococcus agalactiae. El sistema (BD MAX) automatiza e integra la extracción de ADN y la concentración, preparación de los reactivos, y la amplificación de ácido nucleico y la detección de la secuencia diana usando tiempo real PCR. Un control de proceso interno también se incorpora en la lisis, extracción, concentración y etapas de amplificación para monitorear la presencia de posibles sustancias inhibidoras 17.
Una vez obtenidos los resultados se calcularon los índices de sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y negativo, proporción da falsos negativos. El nivel de exactitud de cada prueba se obtuvo utilizando el sistema estadístico IBM SPSS Statistics 25.0.
Se respetaron los criterios éticos emanados de la Resolución 008430 de 1993 del Ministerio de Salud y Protección Social de Colombia y la Declaración de Helsinki 18,19.
RESULTADOS
La edad promedio de la población estudiada fue de 27 años; con edad mínima de15 y máxima de 47, mediana de 26,7 y desviación estándar de 7,5. Al aplicar la prueba molecular PCR en tiempo real se detectaron 42 pacientes colonizadas por SGB, lo que corresponde a un nivel de eficacia del 52 %, mientras que, con la prueba rutinaria se identificaron 4 pacientes colonizadas (ver figura 1).
Por otro lado, los niveles de sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y negativo de la prueba molecular superan en un amplio rango a los de la prueba de rutina con un nivel de eficacia del 95 %; la prueba molecular demostró una sensibilidad de 65, especificidad de 93, valor predictivo positivo (VPP) 91,2 y valor predictivo negativo (VPN) 73,1; mientras que con la prueba de comparación el nivel de positividad fue del 5 % (4/80), con una sensibilidad de 6,2, especificidad de 3, VPP 8,8 y VPN 26,9; valores que se muestra en la figura 2.
DISCUSIÓN
La prueba molecular demostró un alto nivel de positividad en el diagnóstico del Streptococcus agalactiae en mujeres gestantes; lo cual comprueba que el método BD MAX™ posee una mayor eficacia; además de ser rápido y confiable permitiendo aumentar la detección de SGB, y posee alta sensibilidad y especificidad. Con este método se obtuvo una tasa de prevalencia de colonización de SGB en mujeres embarazadas mayor que lo reportado hasta ahora en la literatura científica.
El dato que se registra es de vital importancia si se tiene en cuenta que el grupo de madres-hijo posee alta vulnerabilidad y que está incluido como segmento poblacional prioritario dentro de las políticas de salud pública, no solo en Colombia, sino a nivel mundial, del 3.er Objetivo de Desarrollo Sostenible (ODS) 20. Mientras que la prueba de comparación con el método convencional de cultivo para identificación fenotípica utilizando el CHROMagar™ orientador dio un 5 % de positividad de colonización materna para SGB; prueba que normalmente se viene utilizando y que lleva a reconsiderar la necesidad de asumir los protocolos de identificación del microrganismos, si se tiene en cuenta que las tasas de morbilidad y mortalidad que se generan y que están asociadas con infecciones del recién nacido, incluidas la sepsis neonatal, la neumonía, la meningitis, todas infecciones de alta peligrosidad, pueden comprometer la vida de los neonatos25.
Es importante realizar una revisión de los métodos de tamización, ya que la bacteria sigue produciendo sepsis neonata; fortaleciendo su identificación en el laboratorio y realizar un diagnóstico adecuado que permita al clínico aplicar las conductas terapéuticas y/o profilácticas necesarias.
En nivel de positividad demostrada por la prueba molecular en este estudio se corrobora con lo evidenciado por Schwartz J et al., Miller A et al., Riedlinger J et al., que han demostrado que esta produjo mejores resultados en el diagnóstico del Streptococcus agalactiae en mujeres al final del embarazo que la prueba de rutina 21,22,23 .
Con el método BD MAX™ se aumentó la tasa de detección; lo cual se debe a que la muestra pasa por un caldo de enriquecimiento llamado medio de Lim, que tiene colistina y ácido nalidíxico que inhibe el crecimiento de las bacterias gram negativas y aumenta la densidad bacteriana de SGB presente en la muestra. Además, esta técnica amplifica la secuencia del gen cfb de SGB, lo cual permite la detección del ADN presente 23,26. Se evidencia además una alta prevalencia de SGB en nuestro medio; dato preocupante, en especial porque la tamización no se realiza en todas las instituciones, que por lo general utilizan el cultivo como método de identificación. A uno de los recién nacidos de madre colonizada se le diagnóstico enfermedad invasiva por SGB, lo que ratifica la importancia de la búsqueda de este germen a través de métodos diagnósticos más precisos.
CONCLUSIÓN
Estos resultados permitieron identificar mayor eficacia de la prueba molecular, basada en PCR en tiempo real, frente al método rutinario para la identificación del Streptococcus agalactiae, ya que esta prueba está influenciada por varios factores como, por ejemplo, el tono azul de las colonias en el medio orientador.
Con esta investigación se evidencia la importancia de realizar la prueba de tamizaje en búsqueda de SGB, y así poder tomar acciones profilacticas, ya que sigue siendo una bacteria que amenaza la vida del recién nacido.
