Spanish (pdf)
Article in xml format
Article references
Automatic translation
Send this article by e-mail
Cited by SciELO 
Cited by Google 
Similars in
SciELO 
Similars in Google 
Permalink
Introducción
Las enfermedades hemoparasitarias constituyen uno de los más frecuentes e importantes factores que afectan la productividad de la ganadería bovina. En el período 2004 - 2009, en los Centros de Diagnóstico Veterinario del ICA en Colombia, un 69% de las solicitudes se orientaron hacia las hemoparasitosis 14. Se estima que las pérdidas económicas solamente por anaplasmosis y babesiosis a nivel mundial, ascienden a US$ 2,5 billones/año y en Sur América a US$ 800 millones/año 26. Otras fuentes, sin embargo, consideran que, solamente la tripanosomosis bovina en el llamado “Cinturón de la Mosca Tsé-Tsé en África, causa pérdidas por US$ 4,75 billones al año 13. En Colombia, la tripanosomosis bovina es causada por el Trypanosoma vivax y es considerada endémica en regiones como la Costa Atlántica, los valles de los ríos Cauca y Magdalena y los Llanos Orientales, en zonas situadas por debajo de los 1500 m.s.n.m. 27. En el período 2005-2009, de 12.881 muestras de sangre bovina remitidas a los Centros de Diagnóstico del ICA, 34% fueron positivas para tripanosomas, presumiblemente T. vivax14. En el bajo Cauca antioqueño, en el período 2000-2005, se reportó una prevalencia del parásito en bovinos, de 33,3% 16. Recientemente, el parásito fue reportado en Antioquia a 2486 m.s.n.m. 29. Revisiones sobre T. vivax en África y en Colombia, han sido publicadas en los años 2015 y 2018, respectivamente 7,10.
La anaplasmosis bovina tiene una amplia distribución en Colombia. En el Departamento de Antioquia, A. marginale fue hallado en 59,3% de las muestras bovinas examinadas 14. En general, en zonas bajas y cálidas, la prevalencia de este parásito es alta. Un estudio realizado en el Departamento de Córdoba, reveló que, de 2909 extendidos sanguíneos bovinos examinados, 31,7% eran positivos para este parásito 18.
El control de la tripanosomosis bovina se ha realizado principalmente con el empleo de Diaceturato de 4,4 diazoaminodibenzamidina (Diaceturato) o del Cloruro de Isometamidium. En África, se emplea, además de estos dos compuestos, el Homidium, tanto en su forma de bromuro como de cloruro (19.
El control de la anaplasmosis bovina, tradicionalmente se ha realizado con clorhidrato de oxitetraciclina. Igualmente, el Dipropionato de Imidocarb, el cual también tiene acción contra Babesia sp., se emplea en el control del parásito; existen también unos pocos reportes sobre el uso de enrofloxacina en el tratamiento de la anaplasmosis bovina 5,8.
Aunque en el mercado colombiano existen compuestos que contienen tanto el Diaceturato como la Oxitetraciclina para el control de episodios clínicos de hemopara- sitismo en bovinos 4, no se ha registrado compuesto alguno combinando el Isometamidium con la Oxitetraciclina, el cual sería de utilidad en el control de episodios clínicos de tripanosomosis por T. vivax al tiempo que bloquea el A. marginale, el cual suele acompañar al flagelado en infecciones mixtas. Reveex Laboratorios ha desarrollado el compuesto Isopan® el cual contiene los fármacos mencionados. El presente trabajo evaluó la eficacia del compuesto, contra infecciones por T. vivax y A. marginale, en condiciones de campo.
Materiales y métodos
Sitio de estudio
El estudio se realizó en las instalaciones de la granja Román Gómez Gómez del Politécnico Colombiano Jaime Isaza Cadavid localizado en el municipio de Marinilla en el departamento de Antioquia, con una altura sobre el nivel del mar de 2.150 metros, temperatura promedio 18 ºC con unas coordenadas 6º11’47´´N; 75º20´0´´W. La evaluación se efectuó previa aprobación por parte del ICA para la importación del compuesto Isopan®, al igual que para la realización de la Prueba de Campo (Documento No. 20182113862 de julio 20 de 2018). Así mismo, la Prueba contó con el Aval del Comité de Ética del Politécnico en su Sesión Ordinaria de julio 27 de 2018, en la categoría de “Riesgo Mayor al Mínimo” según se expresa en el Documento 201801005438, comunicado en julio 30 de 2018. Durante el periodo experimental, los animales permanecieron estabulados en corrales enmallados para impedir la entrada de dípteros o arácnidos y durante el estudio recibieron concentrado (2 kg/ animal/día), heno y agua a voluntad de acuerdo con las instrucciones del Comité de Ética del Politécnico Colombiano Jaime Isaza Cadavid.
Fármacos empleados
El producto Isopan® utilizado es una mezcla de isometamidium (10 mg/mL), Clorhidrato de Oxitetraciclina (280 mg/mL) y antipirina (150mg/mL) aplicado por vía intramuscular a la dosis de 1mL/20 k de peso corporal lo cual equivale a 0,5 mg/kg de isometamidium y 14 mk/kg de Oxitetraciclina. El producto está indicado para ser usado en ganado bovino para el tratamiento y prevención de la tripanosomosis con un período de protección de dos a seis meses; además tiene un efecto curativo contra la anaplasmosis Bovina.
Objetivo
Evaluar la eficacia de la asociación Oxitetraciclina - Isometamidium en el control de infecciones con Trypanosoma vivax y Anaplasma marginale en bovinos confinados.
Organismos experimentales
La cepa de A. marginale empleada en el estudio fue obtenida de un bovino del hato del Politécnico que sufrió un episodio de anaplasmosis y la cepa de Trypanosoma vivax fue obtenida originalmente de un bovino que presentó tripanosomosis en una finca en Puerto Berrío, Antioquia.
Animales experimentales
Doce hembras Holstein de aproximadamente 8 meses de edad fueron asignadas al azar a dos grupos, A y B de 6 animales cada uno. En el grupo A, cada ternera fue inoculada por vía intravenosa (IV) con 10 ml de sangre adicionada de Ethylene Diamino Tetracetic Acid (EDTA) como anticoagulante (K2 EDTA, BD), conteniendo la cepa de A. marginale previamente multiplicada en una ternera intacta y que al momento de la inoculación presentaba una parasitemia de 3,5% en un extendido sanguíneo coloreado con Giemsa, lo cual equivale a un inóculo total aproximado de 1,4 x 10 (6 anaplasmas para cada ternera. Las muestras de sangre fueron siempre obtenidas de la vena yugular y adicionadas de anticoagulante en la forma descrita. En el grupo B, Cada ternera fue inoculada vía IV, con la cepa de T. vivax previamente multiplicada también en una ternera intacta y en cuya sangre se observaban tres tripanosomas/ campo microscópico (100X) de un extendido sanguíneo coloreado con Giemsa. La sangre de la ternera tenía un conteo de 7320 glóbulos blancos por ml y al examen se observaron 150 tripanosomas por cada 250 glóbulos blancos en 50 campos microscópicos. Lo anterior significa que, en cada inóculo de 5 ml de sangre, había una población estimada de 2,19 x 10 4 tripanosomas. Antes de la inoculación con los parásitos, cada ternera fue inyectada vía intramuscular con dexametasona, vía intramuscular (IM) a la dosis de 0,1 mg/kg de peso por tres días consecutivos.
Tratamiento
Una vez se configuró un caso clínico (parasitemia y fiebre, manifiestas), los bovinos de cada grupo fueron tratados vía IM con una dosis única del compuesto de 0,5 mg/ kg de isometamidium y 14 mg/kg de oxitetraciclina (en la práctica 1 ml / 20 kg de peso de la asociación mencionada).
Seguimiento
En todos los bovinos se realizó seguimiento a la temperatura rectal, la parasitemia y el hematocrito tanto en la fase post inoculación (PI), como en el período post tratamiento (PT). En el caso de A. marginale las tres variables fueron, en términos generales, registradas en forma diaria o interdiaria en el período PI a partir del día 17 y hasta el día 49, siendo más frecuente cuando la temperatura y/o la parasitemia estaban asociadas con un episodio clínico. La parasitemia con esta rickettsia se calculó contando el número de glóbulos rojos parasitados (en 20 campos microscópicos con objetivo de 100X) y relacionándolo porcentualmente con el número total de glóbulos rojos observados en los campos y se aplicó la fórmula descrita por Benavides 4 así:
Parasitemia (%) = [(GRP en 20 campos / Eritrocitos en 20 campos)] X100.
Dónde: GRP = Glóbulos Rojos Parasitados.
En el período PT, los parámetros mencionados fueron seguidos diariamente (especialmente en los primeros 18 días PT) hasta el día 27 PT. En el caso de T. vivax, tanto la temperatura rectal como la parasitemia y el hematocrito fueron registrados desde el día 7 hasta el día 11 PI; en el caso de este flagelado, se empleó además la prueba de Woo 28 para detectar el parásito. Después del tratamiento, estas variables fueron monitoreadas diariamente en los primeros ocho días PT y luego con menos frecuencia hasta el día 21 PT.
Eficacia
La eficacia del compuesto Isopan® en el tratamiento de las infecciones con A. marginale y T. vivax, se calculó relacionando porcentualmente la parasitemia en el día del tratamiento (DT), con la parasitemia promedio de los ocho días siguientes al mismo. En el caso de A. marginale la parasitemia se expresó en términos de porcentaje de glóbulos rojos parasitados en 20 campos microscópicos con objetivo 100X (Véase Benavides 4), mientras que en el caso de T. vivax, se expresó como el número de tripanosomas por campo microscópico (100X) en un extendido sanguíneo coloreado con Giemsa. En ambos casos la fórmula de Eficacia (E%) empleada fue la siguiente:
E (%) = [(PA-Promedio PD) / PA)] X 100
Donde: PA = Parasitemia antes del tratamiento; PD = Parasitemia Promedio después del tratamiento.
Estadística
Los valores obtenidos de temperatura, parasitemia y hematocrito, antes y después del tratamiento fueron comparados mediante la Prueba de “t”. Se trabajó con un nivel de significancia de 0,05 (error 5%) y todos los cálculos se realizaron con ayuda del programa STATA 1.
Resultados
Anaplasma marginale
Los resultados del seguimiento clínico, hematológico y parasitológico en los bovinos experimentales durante el período PI, se presentan en las tablas 1a 3. Uno de los bovinos inoculados, se mostró totalmente refractario a la infección clínica y debió ser eliminado del grupo. En general, la fiebre y el descenso en el hematocrito, coincidieron con la parasitemia. El seguimiento a este último parámetro permitió establecer que el periódo prepatente estuvo entre 17 y 22 días PI. La figura 1, muestra una alta parasitemia con A. marginale en un extendido sanguíneo coloreado de uno de los bovinos experimentales.
Tabla 1 Seguimiento de la temperatura (ºC) en bovinos inoculados con Anaplasma marginaleen los días siguientes a la inoculación (PI).
Tabla 2 Seguimiento de la parasitemia (%) en bovinos inoculados con Anaplasma marginale, en los días siguientes a la inoculación (PI).
*=no se observan
Tabla 3 Seguimiento del hematocrito (%) en bovinos inoculados con Anaplasma marginale, en los días siguientes a la inoculación (PI).
Las tablas 4, 5y 6, presentan los datos correspondientes a la temperatura, la parasitemia y el hematocrito, respectivamente, en los bovinos en el día del tratamiento con el compuesto (Oxitetraciclina + Isometamidium) y en los días PT.
Tabla 4 Seguimiento de la temperatura (ºC) en bovinos infectados con Anaplasma marginale, y tratados con la asociación Oxitetraciclina - Isometamidium en los días siguientes al tratamiento (PT).
*Día del tratamiento; A = Primer tratamiento; B= Segundo tratamiento
Tabla 5 Seguimiento de la parasitemia (%) en bovinos infectados con Anaplasma marginale y tratados con la asociación Oxitetraciclina - Isometamidium, en los días siguientes al tratamiento (PT).
*Día del tratamiento; A= Primer tratamiento; B= Segundo tratamiento.
Tabla 6 Seguimiento al hematocrito (%) en bovinos infectados con Anaplasma marginale y tratados con la asociación Oxitetraciclina - Isometamidium, en los días siguientes al tratamiento (PT).
*Día del tratamiento; A= Primer tratamiento
En el día del primer tratamiento, todos los bovinos presentaban temperaturas superiores a 40 ºC y fueron disminuyendo gradualmente desde el día 2 PT, para incrementarse de nuevo en los días 10 a 27 en cuatro de las terneras debido a una nueva elevación de la parasitemia. El día del tratamiento, los bovinos presentaban parasitemias variables con A. marginale desde 1.5 hasta 13,0%. Desde el día 1 PT los niveles de parasitemia entraron en franco descenso y, entre los días 4 y 9 PT, mostraron cifras variables entre 0,05 y 0,4%, pero entre los días 10 y 27 PT, varios de los bovinos presentaron parasitemias superiores al 1%. El día del tratamiento, las terneras experimentales, con excepción de la No. 414, presentaban hematocritos inferiores a 25%, como resultado de la parasitemia presente en ese día. Este parámetro empezó a normalizarse (≥28%) entre los días 5 y 10 PT. De ahí en adelante y hasta el día 23 PT el parámetro tiende a descender en algunos animales en concordancia posiblemente con el nuevo incremento de la parasitemia. La eficacia calculada promedio fue de 75,59%, fluctuando entre 58,67 y 90,77%. En todos los animales, la parasitemia en el día del tratamiento, fue significativamente (p<0,05) mayor que la registrada en los diferentes días PT. La tabla 7 presenta los niveles de parasitemia en el día del tratamiento y en cada uno de los 8 días PT al igual que el promedio del parámetro para esos 8 días y el valor de la eficacia obtenida en cada animal.
Trypanosoma vivax
En el período posinoculación (PI), las variables temperatura rectal, parasitemia y hematocrito fueron registradas desde el día 7 hasta el día 11 PI. Las tablas 8 a 10 presentan la información correspondiente. Desde el día 7 PI, tres de las seis terneras evidenciaban fiebre y, entre los días 8 y 9 PI, lo hicieron las otras tres. T. vivax fue observado, tanto en tubo microcapilar 28 como en extendidos sanguíneos coloreados, entre los días 7 y 9 PI, situándose el período prepatente en esos días. El hematocrito presentó, en el día 7 PI valores ≥27% y continuó así, aumentando notoriamente en el día 9 PI. La Figura 2, muestra una alta parasitemia con T. vivax en uno de los bovinos experimentales
Tabla 8 Seguimiento de la temperatura (ºC), en bovinos inoculados con Trypanosoma vivax en los días siguientes a la inoculación (PI).
Tabla 9 Seguimiento de la parasitemia (Tripanosomas/campo), en bovinos inoculados con Trypanosoma vivax, en los días siguientes a la inoculación (PI).
*Woo
Tabla 10 Seguimiento del hematocrito (%) en bovinos inoculados con Trypanosoma vivax, en los días siguientes a la inoculación (PI).
En la fase postratamiento (PT), los datos de temperatura, parasitemia y hematocrito se presentan en las tablas 11, 12 y 13, respectivamente. El día del tratamiento con el compuesto Oxitettraciclina - Isometamidium, cinco de los seis bovinos tratados presentaban fiebre, pero la temperatura rectal empezó a normalizarse desde el día 1 PT y continuó normal hasta el final del estudio (día 21 PT), con excepción de uno de los bovinos que mostró reacción febril nuevamente en los días 7 y 8 PT, previo a una nueva observación del parásito en la sangre en el día 10 PT. En el día del tratamiento, los bovinos presentaron parasitemias con T. vivax entre 1,8 y 11 flagelados por campo microscópico (100X). De ahí en adelante y hasta el día 21 PT, no se observaron tripanosomas en los bovinos, con excepción de uno de ellos que evidenció una parasitemia baja (0,06 tripanosomas/campo) en el día 10 PT. El hematocrito en el día del tratamiento presentó niveles ≥27%. De ahí en adelante los valores de esta variable fueron normales y nunca estuvieron por debajo de 25%.
La ausencia de tripanosomas en los bovinos desde el día 1 PT, hizo innecesario el cálculo de eficacia, la cual, para los 8 días PT, fue de 100%. De todas maneras, el cálculo de eficacia para el bovino que presentó nuevamente parasitemia en el día 10 PT, fue de 98%. Por la misma razón anterior, la estadística no solo no se consideró necesario, dado lo obvio de los resultados, sino que su cálculo envolvía dificultad, considerando que casi todos los datos de parasitemia PT, eran 0 (Cero).
Tabla 11 Seguimiento de la temperatura (ºC) en bovinos infectados con Trypanosoma vivax y tratados con la asociación Oxitetraciclina - Isometamidium en los días siguientes al tratamiento (PT).
*Día del tratamiento
Tabla 12 Seguimiento de la parasitemia (Tripanosomas/campo) en bovinos infectados con Trypanosoma vivax y tratados con la asociación Oxitetraciclina-Isometamidium, en los días siguientes al tratamiento (PT).
*Día del tratamiento. 0= no se observaron tripanosomas
Discusión
Anaplasma marginale
El período prepatente para esta rickettsiosis, observado en el presente trabajo, (17 a 22 días) está dentro del amplio rango reportado en diferentes documentos, el cual es de 15 a 90 días 23; 7 a 60 días 21; 18 a 34 días 4. Cabe anotar que la amplitud del rango del mencionado período, depende de factores diversos como: la concentración del inóculo, la vía de administración, la cepa de Anaplasma, el estatus inmunológico del animal, entre otros. Así mismo, el comportamiento de las variables clínicas, parasitológicas y hematológicas observadas en los bovinos del presente estudio, son las que corresponden a casos clínicos de anaplasmosis, tanto en infecciones naturales como en condiciones experimentales 4,22,25. En la presente prueba, cuatro de los cinco bovinos tratados con el compuesto Oxitetraciclina-Isometamidium, presentaron nuevamente parasitemia con A. marginale, entre los días 10 y 27 PT.
Este hecho es de normal ocurrencia con este parásito, el cual se caracteriza por la persistencia en los animales recuperados de un episodio clínico, tratado con las dosis recomendadas de Oxitetraciclina (10 mg/kg diario por tres días consecutivos). Kocan 20,22) citan cómo varios trabajos realizados con Oxitetraciclina a dosis más altas por varios días consecutivos, no pudieron “limpiar” de A. marginale a los bovinos en los cuales se pretendía eliminar su condición de portador. Resultados similares fueron reportados por otros autores 9.
De otro lado, es conocido que los bovinos que sobreviven a la infección y episodio clínico de anaplasmosis, continúan siendo portadores del parásito por el resto de sus vidas 21 Estos estados, denominados por algunos investigadores “simbiosis tolerante”, permiten al Anaplasma persistir y transmitirse y, al hospedador, desarrollar protección contra organismos homólogos. En este contexto, no parece recomendable “implementar tratamientos que eliminen completamente el parásito en zonas enzoóticas” 23 Al respecto, Benavides et al.,4, manifiestan: “Un compuesto eficaz para el control de los cuadros clínicos relacionados con hemoparasitismos, debe controlar las principales manifestaciones clínicas que pueden poner en peligro la vida del animal, al tiempo que facilite el establecimiento de inmunidad protectiva y retornar a un estado de equilibrio que permita que el animal pueda continuar llevando una vida productiva en ecosistemas endémicos”.
Trypanosoma vivax
En el presente trabajo, el período prepatente observado fue de 7 a 9 días, siendo cercano al de 9 a 14 días reportado en otras investigaciones 17,24. En otros estudios, el período prepatente inició más temprano, siendo de 2 a 10 días 15 y de 4 a 8 días 3. Al igual que con otros hemoparásitos, el período prepatente puede variar con la cantidad de inóculo, la vía de inoculación, el estado inmunológico y sanitario del animal y otros.
La infección provocada por el inóculo de T. vivax usado en la presente investigación, fue de tipo agudo y presentó las manifestaciones clásicas de fiebre, descenso del hematocrito y aumento de la parasitemia descritas para el parásito 3,11,10.
El compuesto Oxitetraciclina-Isometamidium ejerció un excelente control del episodio agudo de tripanosomosis bovina causado por T. vivax y, salvo una parasitemia muy baja (0.06 tripanosomas/campo) observada en uno de los animales en el día 10 PT, el flagelado no pudo ser evidenciado en los extendidos sanguíneos de los bovinos restantes, examinados hasta la terminación del estudio (día 21 PT). La ausencia del parásito en estos bovinos es explicable, dado que el Isometamidium, suministrado a la dosis de 0,5 a 1mg en una sola aplicación, provee protección contra el parásito por 3 a 6 meses 19,2. En Colombia, no se han documentado reportes de resistencia al isometamidium por parte de T. vivax, aunque sí ha sido documentado en el caso del otro compuesto (diaceturato de diazoamino benzamidina) empleado en el control del flagelado 6,12.
Conclusiones
En los bovinos experimentales inoculados con la cepa de campo de A. marginale, el período prepatente varió entre 17 y 22 días PI.
Los resultados muestran que la asociación Oxitetraciclina-Isometamidium (Isopan®) administrada a la dosis recomendada por el productor, permite en los bovinos, superar un episodio clínico de anaplasmosis, como lo indica la normalización de los parámetros clínicos, parasitológicos y hematológicos en los días siguientes a la administración del compuesto.
En cuatro de los cinco bovinos tratados con el compuesto Oxitetraciclina-Isometamidium, se presentó recurrencia de la anaplasmosis clínica entre los días 10 y 27 PT. Este hecho puede obedecer a la conocida persistencia natural del parásito que no permite su esterilización en el organismo animal con una dosis única y puede reactivarse posteriormente.
En los bovinos inoculados con la cepa de campo de Trypanosoma vivax, el período prepatente varió entre 7 y 9 días PI.
El compuesto Isopan® fue eficaz en el control de la infección con Trypanosoma vivax, desde el día siguiente a su aplicación y conservó su eficacia durante todo el período de observación postratamiento (21días).
En ningún momento durante el curso de la Prueba de Eficacia, se observó reacción desfavorable local o sistémica alguna asociada con la aplicación del compuesto.
