Doi: http://dx.doi.org/10.15446/abc.v20n2.43492

Artículo de investigación

EVALUACIÓN DE LA TOXICIDAD DE DOS AGROQUÍMICOS, ROUNDUP^® ACTIVO Y COSMO-FLUX^®411F, EN RENACUAJOS DE ANUROS COLOMBIANOS

Toxicity Assesment of Two Agrochemicals, Roundup^® Active and Cosmo-Flux^®411F, to Colombian Anuran Tadpoles

Liliana Marcela HENAO MUÑOZ¹, Teófila María TRIANA VELÁSQUEZ¹, Manuel Hernando BERNAL BAUTISTA^1.

¹Grupo de Herpetología, Eco-Fisiología y Etología. Departamento de Biología. Universidad del Tolima, Altos de Santa Helena. Ibagué, Colombia.
For correspondence. mhbernal@ut.edu.co

Received: 15 May 2014; Returned for revision: 10 September 2014; Accepted: 23 September 2014.
Associate Editor: Martha Ramírez Pinilla.

Citation / Citar este artículo como: Henao Muñoz LM, Triana Velásquez TM, Bernal Bautista MH. Evaluación de la toxicidad de dos agroquímicos, Roundup^® Activo y Cosmo-Flux^®411F, en renacuajos de anuros colombianos. Acta biol. Colomb. 2015;20(2):153-161. doi: http://dx.doi.org/10.15446/abc.v20n2.43492

RESUMEN

El Roundup^® Activo es un herbicida elaborado a base de glifosato ampliamente utilizado en Colombia para el control de malezas. Sin embargo, para su aplicación requiere ser mezclado con un coadyuvante que facilite su acción, tal como el Cosmo-Flux^®411F el cual mejora la adherencia y fijación del herbicida en las hojas de las plantas. El objetivo de este estudio fue determinar la concentración letal media (CL₅₀) y algunos efectos subletales (cambios en el tamaño corporal y en el desempeño natatorio) del Roundup^® Activo y del Cosmo-Flux^®411F en renacuajos de cuatro especies de anuros colombianos expuestos bajo condiciones controladas de laboratorio y en microcosmos. La especie más sensible a la exposición del Roundup^® Activo fue Hypsiboas crepitans (Laboratorio: CL₅₀ = 1414 µg a.e. de glifosato/L y microcosmos: CL₅₀= 4 kg a.e. de glifosato/ha) y para el Cosmo-Flux^®411F Rhinella humboldti (Laboratorio: CL₅₀= 319 mg/L y microcosmos: CL₅₀ = 632,3 L/ha). En laboratorio y microcosmos, la exposición al Roundup^® Activo no alteró el tamaño corporal ni el desempeño natatorio de los renacuajos, mientras que el Cosmo-Flux^®411F generó alteraciones del tamaño corporal pero no afectó el desempeño natatorio. Al comparar los CL₅₀ de los dos agroquímicos con las concentraciones empleadas en campo, el Roundup^® Activo generó un riesgo moderado mientras que el Cosmo-Flux^®411F no resultó letal. Además, el Roundup^® Activo fue notablemente más tóxico que el Cosmo-Flux^®411F.

Palabras clave: anfibios, CL₅₀, efectos subletales, glifosato.

ABSTRACT

Roundup^® Active is an herbicide based on glyphosate widely used in Colombia for control of illicit crops and weeds. However, it must be mixed with an adjuvant that facilitates its action, such as the Cosmo-Flux^®411F which improves the adhesion and fixation of the herbicide into the leaves of the plants. The aim of this study was to determine the median lethal concentration (LC₅₀) and some sublethal effects (changes in body size and swimming performance) of the Roundup^® Active and the Cosmo-Flux^®411F to tadpoles of four Colombian anuran species exposed under laboratory and microcosm conditions. The most sensitive species to exposure of Roundup^® Active was Hypsiboas crepitans (Laboratory: LC₅₀= 1414 µg a.e. glyphosate/L; microcosm: LC₅₀= 4 kg a.e. glyphosate/ha), and for Cosmo-Flux^®411F was Rhinella humboldti (Laboratory: LC₅₀= 319 mg/L; microcosm: LC₅₀= 632.3 L/ha). In laboratory and microcosms, Roundup^® Active did not alter the tadpole body size nor the swimming performance, while the Cosmo-Flux^®411F generated changes in the body size but not in the swimming performance. Comparing the LC₅₀ of the two agrochemicals with respect to concentrations used in field, the Roundup^® Active exerted a moderate risk whereas the Cosmo-Flux^®411F was not lethal. In addition, the Roundup^® Active was notably more toxic than the Cosmo-Flux^®411F.

Keywords: amphibians, glyphosate, LC₅₀, sublethal effects.

INTRODUCCIÓN

El glifosato es uno de los herbicidas de mayor uso comercial en el mundo (Plötner y Matschke, 2012), el cual es vendido por numerosas casas comerciales bajo diferentes marcas (Woodburn, 2000), entre las que se encuentran: Roundup^®, Rodeo^®, Ranger^®, Glyphos^®. Los herbicidas a base de glifosato son ampliamente utilizados en la agricultura colombiana para la erradicación de malezas, y entre el 10 % y el 14 % es utilizado para el programa de erradicación de cultivos ilícitos de coca y amapola (Solomon et al., 2007). Particularmente, el Roundup^® Activo es una de las presentaciones de glifosato principalmente empleadas para el control de arvenses en el país (Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial, 2007).

Los estudios sobre los efectos del glifosato y sus productos formulados han concluido que resulta mediana a altamente tóxico para las especies de anuros expuestas en condiciones de laboratorio (Relyea, 2004; Wojtaszek et al., 2004; Relyea, 2005; Bernal et al., 2009a), en donde las diferencias en la toxicidad pueden estar relacionadas con las sustancias tensoactivas no iónicas presentes en las formulaciones comerciales (Plötner y Matschke, 2012). También, que su interacción con otros factores como el pH (Edginton et al., 2004) y la disponibilidad del alimento (Chen et al., 2004) potencian su efecto. Sin embargo, cuando los experimentos se han realizado bajo condiciones de microcosmos se ha observado una reducción significativa en la toxicidad del glifosato (Wojtaszek et al., 2004; Bernal et al., 2009b), la cual es atribuida a la materia orgánica y macrófitas acuáticas presentes en este tipo de experimentos que favorecen la degradación del glifosato a su principal metabolito, ácido aminometil fosfórico (AMPA) (Plötner y Matschke, 2012). Triana et al., (2013), en un estudio reciente con embriones de anuros colombianos, también encontraron que el Roundup^® Activo resultó altamente tóxico en los experimentos de laboratorio, pero que su toxicidad disminuyó ostensiblemente en las pruebas de microcosmos, incluso hasta valores que representarían un riesgo leve (20 % de letalidad) para las especies de estudio.

En los últimos años se han reportado múltiples efectos morfológicos y fisiológicos en anuros expuestos al glifosato (Lajmanovich et al., 2003). Dentro de los efectos morfológicos se encuentran la presencia de deformidades en la cola (Williams y Semlitsch, 2010) y en el intestino de las larvas (Lenkowski et al., 2010), defectos en el desarrollo de la cresta neural y el esqueleto craneofacial (Mann et al., 2009). Cauble y Wagner (2005) también indican que las larvas de Rana cascadae al ser expuestas a una concentración de 1 mg/L de glifosato presentan una menor masa corporal en comparación con el grupo control. Dentro de los efectos fisiológicos en anuros se reportan alteraciones en la actividad de las enzimas hepáticas en Lithobates catesbeianus (Costa et al., 2008), efectos sobre el metabolismo de las hormonas tiroideas (Howe et al., 2004; Mann et al., 2009), alteraciones en el ADN (Mann et al., 2009) y en la síntesis del ARN (Howe et al., 2004).

Numerosos trabajos se han realizado sobre el impacto del glifosato en los anuros; sin embargo, el herbicida glifosato requiere ser aplicado en combinación con un coadyuvante que facilite su fijación y penetración en las hojas, tal como el Cosmo-Flux^®411F el cual es ampliamente utilizado en Colombia durante la aspersión de cultivos ilícitos (Solomon et al., 2005). El Cosmo-Flux^®411F es un aceite isoparafínico de alta pureza, con muy baja fitotoxicidad, muy bajo contenido de aromáticos y baja tensión superficial que mejora la humectabilidad, promoviendo así la eficacia de los ingredientes activos (Cosmoagro, 2014). Henao et al., (2013) evaluaron la toxicidad del Cosmo-Flux^®411F en embriones de anuros encontrando que las concentraciones sugeridas de aplicación en campo no resultan tóxicas, ni afectan la tasa de crecimiento y desarrollo; sin embargo, en este estudio no se tuvieron en cuenta estadíos más avanzados de desarrollo, como los renacuajos, los cuales han sido reportados como muy sensibles a contaminantes del agua (Egea-Serrano et al., 2012). También, Rondón et al., (2007) desarrollaron un trabajo en el pez Cachama blanca (Piaractus brachypomus) en donde concluyeron que el Cosmo-Flux^®411F era letal a concentraciones mayores a las aplicadas en campo, y los reportes de Bernal et al., (2009b), quienes evaluaron el efecto tóxico de la mezcla glifosato (Glyphos^®) y Cosmo-Flux^®411F en anuros bajo condiciones de microcosmos, la cual no resultó ecológicamente letal. De acuerdo con lo anterior, este trabajo pretende determinar la toxicidad y algunos efectos subletales generados por la aplicación individual del herbicida glifosato, en su presentación comercial como Roundup^® Activo, y del coadyuvante Cosmo-Flux^®411F, en renacuajos de cuatro especies de anuros colombianos bajo condiciones experimentales de laboratorio y microcosmos.

MATERIALES Y MÉTODOS

Especies de estudio

Este trabajo se realizó con renacuajos en estadío 25 (Gosner, 1960) de cuatro especies de anuros colombianos: Rhinella marina (Linnaeus, 1758), Rhinella humboldti (Gallardo, 1965), Hypsiboas crepitans (Wied-Neuwied, 1824) y Engystomops pustulosus (Cope, 1864), las cuales se seleccionaron por encontrarse frecuentemente en áreas de cultivo donde podrían estar expuestas al contacto con estos agroquímicos, no encontrarse en ninguna categoría de amenaza y ovopositar un número elevado de huevos (Guayara-Barragán y Bernal, 2012).

Las posturas de huevos de las especies fueron colectadas en diferentes lugares del departamento del Tolima, Colombia: R. marina en el municipio de San Luis (04°17' N, y 75°05' W); R. humboldti, en los alrededores de la ciudad de Ibagué (04°25' N, y 75°12' W); H. crepitans y E. pustulosus en el municipio de Coello (04°15' N, y 74°58' W). Las posturas colectadas fueron transportadas separadamente en contenedores plásticos y con agua del lugar de colecta al laboratorio de Herpetología de la Universidad del Tolima, y allí se trasladaron a recipientes con agua previamente declorada por aireación continua, a una temperatura de 23-24 °C, hasta que alcanzaron el estadío 25 (Gosner, 1960). Los renacuajos no fueron alimentados previamente ni durante los experimentos.

Agroquímicos evaluados

Roundup^® Activo. Herbicida sistémico con una concentración de 363 g/L de ácido de glifosato de formulación a 20 °C, equivalente a 416 g/L de sal potásica de N-(fosfonometil)-glicina (Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial, 2007). El producto cuenta con licencia de venta número 470 expedida por el Instituto Colombiano Agropecuario ICA (Cosmoagro, 2014). De acuerdo con la clasificación del Ministerio de Salud de Colombia, este producto se encuentra en la categoría toxicológica III (ligeramente peligroso para la salud humana). La concentración de glifosato sugerida para su aplicación en la agricultura es de 1,77 kg a.e./ha (Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial, 2007) y para el control de cultivo ilícitos en Colombia es de 3,69 kg a.e./ha (Solomon et al., 2007).

Cosmo-Flux^®411F. El Cosmo-Flux^®411F es un coadyuvante estéreo-específico de carácter no-iónico, cuyo ingrediente activo constituye una mezcla de esteres de hexitan (17 %) e isoparafinas líquidas como ingredientes aditivos (83 %). El producto cuenta con la licencia de venta número 2186 expedida por el Instituto Colombiano Agropecuario ICA (Cosmoagro, 2014) y se encuentra clasificado por el Ministerio de Salud de Colombia en la categoría toxicológica IV (ligeramente tóxico para la salud humana). Cosmoagro^®, empresa que se encarga de la comercialización del CosmoFlux^®411F, sugiere su aplicación en un volumen de 0,5 a 1 L/ha, o entre 1,5 y 10 mL/L, equivalente a 255 y 1700 mg/L.

Evaluación de la toxicidad

Experimentos en condiciones controladas de laboratorio.

Durante 96 horas, diez renacuajos de cada especie más su réplica (n = 20 por tratamiento) fueron expuestos por separado a cinco concentraciones del herbicida Roundup^® Activo: 325; 750; 1500; 3000 y 6000 µg a.e. de glifosato/L; y del coadyuvante Cosmo-Flux^®411F: 106,25; 212,5; 425; 850 y 1700 mg/L. Cada réplica contó con un control negativo (agua declorada). Los renacuajos se expusieron en un litro de la solución experimental (diez renacuajos/litro) dentro de peceras de vidrio con capacidad para 2 litros. El agua utilizada para preparar las soluciones fue previamente declorada por aireación. El experimento consistió en un sistema semiestático en donde las soluciones fueron renovadas totalmente cada 24 horas, esto con el fin de mantener constantes las concentraciones de los agroquímicos evaluados, y antes y después de los recambios se registraron a una profundidad media los parámetros fisicoquímicos de conductividad, oxígeno disuelto, alcalinidad, dureza, temperatura y pH (Tabla 1). Los experimentos se realizaron con un fotoperiodo de luz–oscuridad de 12:12 horas, mantenida a través de lámparas de luz blanca (Phillips TLT 20W/54RS) conectadas a un temporizador digital (General Electric PM621). La toxicidad de cada agroquímico se determinó a través de la concentración letal media (CL₅₀) para cada una de las especies. Estos valores se calcularon de acuerdo a la mortalidad acumulada en las concentraciones experimentales a las 96 horas, a través del método TSK Trimmed Spearman-Karber (Versión 1.5) (Hamilton et al., 1977).

Experimentos en condiciones de microcosmos. Los microcosmos son montajes experimentales que se pueden realizar en el laboratorio incluyendo componentes de los sistemas naturales para evaluar los efectos de contaminantes ambientales (Van Leeuwen y Vermeire, 2007). Para el presente estudio, los microcosmos se elaboraron con recipientes de polietileno de 70 cm de diámetro y 13 cm de profundidad (área experimental = 0,1520 m²), a los que se adicionó una capa de tierra (450 g) y arena (647 g) obtenidas del jardín botánico de la Universidad del Tolima. Luego, los recipientes se cubrieron internamente con una tela blanca (muselina), para facilitar la posterior observación y el conteo de los organismos, y se les adicionó diez litros de la solución experimental (2,5 renacuajos/litro), preparada con agua previamente declorada, más hojarasca (dos hojas secas), piedras (cuatro a cinco piedras de tamaño pequeño, 100 g) y una macrófita. Estos microcosmos se ubicaron aleatoriamente en un área ventilada del laboratorio con una temperatura ambiental promedio de 24 ± 2 °C y un fotoperiodo fluctuante de 12 horas luz–12 horas oscuridad, aproximadamente, donde se dejaron en reposo durante una hora antes de colocar los organismos de experimentación en el centro de los recipientes.

Durante 96 horas, 25 renacuajos más su réplica (n=50 por tratamiento) fueron expuestos separadamente a cinco concentraciones del herbicida Roundup^® Activo: 1,845; 3,69; 7,38; 14,76 y 29,52 kg a.e. de glifosato/ha; y del coadyuvante Cosmo-Flux^®411F: 205,5 (= 53,1 mg/L); 410,9 (= 106,2 mg/L); 821,9 (= 212,4 mg/L); 1643,9 (= 424,8 mg/L) y 3287,9 L/ha (= 849,6 mg/L), ajustadas de acuerdo con el área experimental. Cada réplica contó con un control negativo (agua declorada). Este experimento consistió en un sistema estático sin recambio de las soluciones experimentales ni del control, donde los parámetros fisicoquímicos de pH, temperatura, conductividad y oxígeno disuelto se registraron a las 0, 24, 48, 72 y 96 horas a una profundidad media. También se registró la alcalinidad y dureza de las concentraciones experimentales al iniciar y finalizar la exposición. Los valores promedio y la desviación estándar de los parámetros fisicoquímicos registrados a las 0 y 96 horas se resumen en la Tabla 1. La toxicidad del Roundup^® Activo y del Cosmo-Flux^®411F se determinó a través de la CL₅₀, de la misma manera que en las pruebas de laboratorio.

Evaluación de efectos subletales

El análisis de los efectos subletales generados por el herbicida Roundup^® Activo y el coadyuvante CosmoFlux^®411F se realizó con los individuos sobrevivientes de las dos primeras concentraciones experimentales y el control, donde la sobrevivencia fue superior al 50 % en todas las especies, tanto para los experimentos de laboratorio como los de microcosmos. Para esto, al finalizar las 96 horas de exposición, por cada concentración se seleccionaron diez renacuajos sin deformidades aparentes provenientes de las pruebas de laboratorio, y veinte renacuajos de las pruebas de los microcosmos, los cuales fueron fotografiados para medir el ancho corporal, longitud corporal, longitud de la cola y longitud total con la ayuda del programa Image J (http://rsbweb.nih.gov/ij/). Estos datos fueron analizados a través de un análisis multivariado de varianza (MANOVA) y luego con análisis de varianza factoriales (ANOVAS) para establecer diferencias entre las medidas morfométricas de las especies por cada concentración experimental. Adicionalmente, los renacuajos se sometieron a una prueba de capacidad natatoria, que consistió en estimular con un pincel la parte posterior de la cola del renacuajo hasta que este se desplazara a través de una pista de agua de 50 cm de largo x 1 cm de ancho x 1 cm de alto, construida con un canal de plástico que incluía lateralmente una cinta métrica. El agua de la pista fue agua declorada con una temperatura promedio de 23 ± 1,4 ºC. Por cada organismo se realizaron tres pruebas y entre estas se escogió el registró de la máxima distancia recorrida (cm) y la máxima velocidad alcanzada (cm/s). Estos datos fueron comparados a través de un análisis multivariado de covarianza (MANCOVA) y posteriores análisis de covarianzas (ANCOVAS), teniendo en cuenta la longitud total de los organismos como covariable.

RESULTADOS

La especie más sensible a la exposición del Roundup^® Activo bajo condiciones de laboratorio y microcosmos fue H. crepitans (Laboratorio: CL₅₀ = 1414 µg a.e. de glifosato/L y microcosmos: CL₅₀ = 4 kg a.e. de glifosato/ha) y la más resistente en laboratorio fue E. pustulosus (CL₅₀ = 2789 µg a.e. de glifosato/L) y en microcosmos R. marina (CL₅₀ = 16,9 kg a.e. de glifosato/ha) (Tabla 2). Para el caso de la exposición al Cosmo-Flux^®411F, R. humboldti presentó la mayor sensibilidad bajo condiciones de laboratorio (CL₅₀ = 319 mg/L) y microcosmos (CL₅₀ = 632,3 L/ha), mientras que H. crepitans mostró la mayor tolerancia en condiciones de laboratorio (CL₅₀ = 1457 mg/L) y en microcosmos, en donde el valor CL₅₀ no pudo ser calculado por el programa debido a la baja mortalidad presentada (Tabla 3).

Las especies expuestas al Roundup^® Activo bajo las dos condiciones experimentales no presentaron alteraciones significativas en el tamaño corporal (Laboratorio: Hotelling T² = 0,02; p = 0,8433 y microcosmos: Hotelling T² = 0,04; p = 0,3647), ni en la capacidad natatoria (Laboratorio: Hotelling T² = 0,08; p = 0,9469 y microcosmos: Hotelling T² = 0,18; p = 0,8956). Por el contrario, los organismos expuestos al Cosmo-Flux^®411F sí presentaron diferencias significativas en las medidas morfométricas bajo las dos condiciones experimentales (Laboratorio: Hotelling T² = 0,11; p = 0,0041 y microcosmos: Hotelling T² = 0,11; p = 0,0020). En las pruebas de laboratorio, el ancho corporal fue la variable que generó la diferencia entre las concentraciones evaluadas del Cosmo-Flux^®411F y el control (ANOVA, F = 3,52; p = 0,0315) (Fig. 1), mientras que en las pruebas de microcosmos todas las variables morfométricas presentaron diferencias significativas con respecto al control (ANOVA, p < 0,05 para todos los casos) (Fig. 2). La capacidad natatoria en las especies expuestas al Cosmo-Flux^®411F tampoco se vio afectada significantemente (Laboratorio: Hotelling T² = 0,18; p = 0,7969 y microcosmos: Hotelling T² = 0,12; p = 0,9430).

Los parámetros fisicoquímicos de las soluciones registrados antes y después de los recambios en las condiciones de laboratorio y durante las 96 horas en las pruebas de microcosmos no variaron drásticamente (Tabla 1), aunque en los microcosmos el oxígeno disuelto mostró una reducción significativa a lo largo de las 96 horas, tanto para los experimentos con el Roundup^® Activo (Pearson r = -0,508; p = 0,000) como con el CosmoFlux^®411F (Pearson r = -0,162; p = 0,012) (Tabla 1).

DISCUSIÓN

El Roundup^® Activo resultó letal para las especies de estudio expuestas bajo condiciones de laboratorio, a excepción de E. pustulosus, ya que los CL₅₀ experimentales fueron menores en comparación con la concentración de glifosato estimada para su aplicación, de acuerdo con el programa de erradicación de cultivos ilícitos (5392,92 µg a.e. de glifosato/L = 3,69 kg a.e. de glifosato/ha), o para la agricultura (2586,84 µg a.e. de glifosato/L = 1,77 kg a.e. de glifosato/ha) (Tabla 2). Por su parte, los CL₅₀ de las especies expuestas bajo las condiciones de microcosmos fueron notablemente mayores a la concentración empleada de glifosato para la erradicación de cultivos ilícitos y en la agricultura, con la excepción de H. crepitans cuyo CL₅₀ fue 4 kg a.e. de glifosato/ha, un valor muy cercano a la concentración usada en el programa de erradicación de cultivos ilícitos y que representa una mortalidad aproximada del 50 %.

Para el caso de la exposición al Cosmo-Flux^®411F bajo condiciones de laboratorio, al comparar los CL₅₀ hallados para las especies con la concentración máxima sugerida para su aplicación por Cosmoagro (2014), de 10 mL/L = 1700 mg/L, estos valores fueron menores, indicando que el coadyuvante es tóxico para las especies de estudio (Tabla 3). Por el contrario, los valores CL₅₀ obtenidos en los microcosmos (Tabla 3) resultaron mayores comparados con la dosis de aplicación recomendada por Cosmoagro (0,5 a 1 L/ha), mostrando que este coadyuvante no resulta tóxico para los renacuajos de ninguna de las especies. Incluso, en la especie H. crepitans la mortalidad acumulada en cada concentración experimental fue tan baja que no se pudo calcular el valor CL₅₀.

Los valores de toxicidad obtenidos para el Roundup^® Activo en condiciones de laboratorio, entre 1414 y 2789 µg a.e. de glifosato/L, se encuentran dentro del rango reportado para otras especies expuestas a diferentes presentaciones comerciales de glifosato (Edginton et al., 2004; Relyea y Jones, 2009; Moore et al., 2012). Particularmente, los intervalos de confianza de los CL₅₀ encontrados para el Roundup^® Activo no se diferenciaron significantemente con los reportados por Bernal et al., (2009a) para la mezcla del glifosato (Glyphos^®) y el Cosmo-Flux^®411F, a excepción de H. crepitans que resultó ser la especie más sensible, y de los hallados por Triana et al., (2013) en embriones de estas especies expuestas al Roundup^® Activo. Por su parte, la alta toxicidad del coadyuvante Cosmo-Flux^®411F encontrada en las pruebas de laboratorio (valores CL₅₀ menores a la concentración máxima sugerida de aplicación = 1700 mg/L), concuerda con los resultados hallados para los embriones en tres de las cuatro especies evaluadas por Henao et al., (2013), R. humboldti, R. marina y H. crepitans, en donde los valores de CL₅₀ (desde 495,18 hasta 858,26 mg/L) también resultaron inferiores a la concentración de aplicación en campo.

Los renacuajos expuestos al Roundup^® Activo presentaron una sensibilidad menor en condiciones de microcosmos que bajo las pruebas de laboratorio, como ha sido reportado en otros estudios (Relyea, 2004; Tsui y Chu, 2004; Wojtaszek et al., 2004; Triana et al., 2013), probablemente por la disminución en la concentración del glifosato en este medio a partir de las primeras 24 horas (Trumbo, 2005). Por el contrario, el Cosmo-Flux^®411F presentó una toxicidad mayor en condiciones de microcosmos que en las pruebas de laboratorio (Tabla 3). Lo anterior concuerda con el estudio realizado por Henao et al., (2013), quienes encontraron una mayor mortalidad en embriones de anuros expuestos al Cosmo-Flux^®411F bajo condiciones de microcosmos que en laboratorio, atribuido a la falta de renovación de las soluciones experimentales. Aunque los renacuajos en estadíos tempranos pueden nadar hacia la superficie, como fue observado frecuentemente, la mayor parte del intercambio gaseoso lo realizan a través de su piel (McDiarmid y Altig, 1999), ya que la función primaria de los pulmones está relacionada con la flotabilidad más que con la respiración (McDiarmid y Altig, 1999). Así, la disminución del oxígeno probablemente pudo ser un factor crítico que contribuyó a la mayor sensibilidad de los renacuajos ante la exposición del Cosmo-Flux^®411F.

En las pruebas de toxicidad del Roundup^® Activo bajo las condiciones de microcosmos, la concentración del oxígeno en las soluciones experimentales también disminuyó significantemente (Tabla 1), no obstante estos valores no decayeron tan drásticamente como en el caso del CosmoFlux^®411F y se encuentran dentro del rango tolerante para algunas especies de anuros (Bernal et al., 2011).

A diferencia del trabajo realizado por Cauble y Wagner (2005), quienes encontraron que las larvas de R. cascadae al ser expuestas al glifosato aceleraban su metamorfosis reduciendo significativamente su tamaño, en este estudio la exposición al Roundup^® Activo no afectó el tamaño corporal de los renacuajos de las especies expuestas, incluso dicha exposición tampoco afectó la capacidad natatoria. Estos resultados contradicen estudios como el de Relyea (2012) quien señala que la exposición al Roundup^® en R. sylvatica y R. pipiens induce cambios en la cola de los renacuajos, los cuales podrían interferir en su desempeño natatorio afectando su capacidad de respuesta ante depredadores (Kats et al., 2000; Belden y Blaustein, 2002). Para el caso de la exposición al Cosmo-Flux^®411F, este sólo generó alteraciones en el tamaño corporal de las especies a partir de una concentración de 106,25 mg/L en laboratorio y de 205,5 L/ha (53,1 mg/L) en microcosmos, correspondiente a más de 205 veces la dosis mayor empleada en campo (Figs. 1 y 2).

CONCLUSIONES

Comparando las concentraciones sugeridas de aplicación de los dos agroquímicos con los valores CL₅₀ obtenidos en las condiciones de microcosmos, las cuales reflejan en mejor medida las condiciones reales de campo, el Roundup^® Activo representa un riesgo moderado, ya que puede causar una mortalidad hasta del 50 % en dos de las cuatro especies de estudio, en tanto que el Cosmo-Flux^®411F no resulta letal. Los datos de laboratorio y microcosmos también confirman la diferencia en el efecto tóxico entre estos dos agroquímicos, en donde el Roundup^® Activo resultó aproximadamente 700 veces más tóxico que el Cosmo-Flux^®411F. De acuerdo con estos resultados, y a reportes sobre el efecto combinado del glifosato y el Cosmo-Flux^®411F (Bernal et al., 2009a; Bernal et al., 2009b), la toxicidad generada por la mezcla utilizada en campo podría ser atribuida al herbicida glifosato.

AGRADECIMIENTOS

Este trabajo hace parte de la beca pasantía otorgada a Liliana Marcela Henao y Teófila María Triana como Jóvenes Investigadoras de Colciencias durante el año 2013. El proyecto fue financiado por el Fondo de investigaciones de la Universidad del Tolima (código 220212) y obtuvo el permiso de investigación científica en diversidad biológica de la Corporación Autónoma Regional del Tolima, CORTOLIMA (Resolución N° 2886 de 2011). Los autores agradecen a Jorge Luis Turriago González por su apoyo en el montaje de los experimentos.

REFERENCIAS

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