Abstract

MARTINEZ, Ana P.; MARTINEZ, Sixta T.  and  ARDILA, Harold D.. Condições para a análise eletroforética de proteínas apoplásticas de caules e raízes de cravo (Dianthus caryophyllus L.) para estudos proteômicos. Rev.Colomb.Quim. [online]. 2017, vol.46, n.2, pp.5-16. ISSN 0120-2804.  https://doi.org/10.15446/rev.colomb.quim.v46n2.62958.

No presente estudo, é descrito um fluxo de trabalho que pode ser aplicado a espécies vegetais diferentes, para obter extratos apoplásticos que podem ser utilizados para análise proteômico. Para isto, utilizando os caules e as raízes do cravo, foram avaliados parâmetros considerados chave para a extração destas proteínas. Foi determinado que para esta espécie, deve ser utilizada uma solução tampão de fosfato de sódio 0,1 M pH 6,5 com cloreto de sódio 50 mM e 0,1% β-mercaptoetanol para a infiltração; com três aplicações de vácuo de 20 s a 70 kPa e centrifugação a 1000 x g por 20 minutos a 4°C, e subsequente precipitação e concentração de proteínas usando Ácido ricloroacético/acetona. Nestas condições se podem obter extratos que permitem a análise eletroforética 2D de proteínas do apoplasto utilizando para a focalização isoeléctrica tiras com gradientes de pH 5-8 para a raiz e de pH 3-10 para o caule. As condições descritas permitirão aprofundar sobre o papel das proteínas apoplásticas numa diversidade de fenômenos biológicos que envolvem esta espécie de planta.

Keywords : Fluido apoplástico; Fusarium oxysporum f. sp. dianthi; patógeno de planta; eletroforese.

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