Introducción
De las carnes más consumidas, la de pollo representa una opción interesante en temas de sostenibilidad, ya que, desde el punto de vista de la conversión alimenticia, es más eficiente que la de bovino y cerdo (1). Actualmente, la carne más consumida en el mundo es la de cerdo, seguida por la de pollo y la de bovino. No obstante, nuevas proyecciones económicas demuestran que en pocos años la carne de pollo será la más consumida del mundo (2).
Para el crecimiento del sector avícola en el mundo, y con el objetivo de suplir las necesidades y demandas de carne generadas por el mercado, se han desarrollado avances tecnológicos en incubación, genética, reproducción, alimentación y nutrición (3). Entre los avances más significativos en nutrición se encuentra la estandarización de tablas nutricionales para alimentación de las aves (4) y el uso de aditivos que favorecen la eficiencia productiva de los animales. La Unión Europea limita el uso de antibióticos en producción animal; permite su uso terapéutico y prohíbe el uso de antibióticos promotores de crecimiento (APC), conocido como uso profiláctico, además del uso metafiláctico (5).
En los últimos años se han buscado alternativas viables al uso de APC y se han encontrado varias especias y hierbas que contienen aceites esenciales, los cuales podrían ser usados como promotores de crecimiento en la alimentación animal. Estos aditivos fitogénicos (fitobióticos) pueden tener más de un modo de acción, lo que mejora la ingesta de alimento y sabor, la secreción de enzimas digestivas, la motilidad gástrica e intestinal, la estimulación endocrina, la estimulación inmune, la actividad antiinflamatoria y antioxidante y la actividad antimicrobiana, antiviral, antihelmíntica y coccidiostática (6).
Diversos autores como Betancourt (7), Padilla (8) y Shiva (9) manifiestan que los aceites esenciales de orégano (AEO) se han propuesto como aditivos naturales para su uso en la alimentación en pollos de engorde y reemplazo de los antibióticos promotores de crecimiento. Se ha demostrado que el Lippia origanoides, u orégano de monte, nativo de Colombia, tiene gran potencialidad como promotor nutricional de crecimiento en pollos de engorde y se presenta como una alternativa natural al uso de APC (7).
Por lo anterior, el objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la inclusión de tres concentraciones de AEO de Lippia origanoides sobre metabolitos sanguíneos en pollos de engorde de la línea genética Cobb 500.
Materiales y métodos
Consideraciones éticas
Todos los procedimientos experimentales se llevaron a cabo de acuerdo con las guías propuestas por The International Guiding Principles for Biomedical Research Involving Animals (Cioms, 2012) (10). Esta investigación fue avalada por el Comité de Ética en la Experimentación Animal de la Universidad Nacional de Colombia, sede Medellín (Cemed 045 del 10 de junio de 2014).
Localización
El trabajo de campo se realizó en el centro de producción San Pablo, perteneciente a la Universidad Nacional de Colombia, sede Medellín, ubicado en el municipio de Rionegro, Antioquia, paraje El Tablacito, localizado a 2100 m s. n. m., con una temperatura entre 12 y 18 °C, que corresponde a una zona de vida bosque muy húmedo montano bajo (bmh-MB).
Animales
Se utilizaron 200 pollos machos de línea Avian Cobb 500 de un día de nacidos, alojados en corrales en piso. El periodo experimental tuvo una duración de 42 días. La cría se realizó siguiendo procedimientos comerciales en una granja experimental.
Manejo sanitario
Para el recibimiento de los pollos se realizó lavado, limpieza y desinfección del galpón, cortinas, comederos y bebederos. Además, se hizo el control de roedores e insectos con productos obtenidos en casas comerciales. Las criadoras se encendieron cinco horas antes de la llegada de los animales.
Dietas
Los animales fueron alimentados con dos dietas: dieta comercial con la adición de antibiótico y sin este. Las diferentes concentraciones de AEO (L. origanoides) se adicionaron en la dieta comercial sin antibiótico, así:
Dieta 1 (control): alimento comercial sin antibiótico (AC), sin adición AEO.
Dieta 2: alimento comercial con antibiótico, sin adición de AEO.
Dieta 3: AC + 75 ppm de AEO.
Dieta 4: AC + 100 ppm de AEO.
Dieta 5: AC + 200 ppm de AEO.
Se elaboró una dieta (tabla 1) multietapa que cumplía con los requerimientos mínimos nutricionales establecidos por Rostagno et al. (2011) (4). El alimento utilizado en el estudio estuvo libre de antibióticos (excepto la dieta D2, en la que se utilizó bacitracina de zinc como APC). Para el experimento no fue necesario modificar la dieta. Solo se adicionaron las concentraciones de AEO de Lippia origanoides a tres niveles. Los animales tuvieron acceso a agua a libre voluntad durante el tiempo de duración del experimento. Los pollos consumieron las dietas que les correspondieron desde el día 1 del experimento. Las primeras evaluaciones se realizaron el día 14 de experimentación para que los parámetros evaluados tuvieran como única variable el alimento consumido. Además se pudo verificar que el día 1 todos venían con parámetros de metabolitos sanguíneos similares.
Materia prima | Cantidad | % | |
---|---|---|---|
Lisina HCL | 2,4 | 0,238 | |
Metionina DL | 2,5 | 0,246 | |
Bentonita DL | 4,0 | 0,400 | |
Cloruro de colina 60 % | 0,5 | 0,050 | |
Sal yodada | 2,0 | 0,200 | |
Treonina-L | 0,7 | 0,066 | |
Fosfato mondicalcico 21 % | 6,6 | 0,656 | |
HNA carne 50P/17G/18C | 15,0 | 1,500 | |
Carbonato de calcio | 15,0 | 1,500 | |
Harina arroz 8-18 | 26,6 | 2,664 | |
Soya 18 integral | 88,3 | 8,830 | |
Torta soya 48 % | 250,0 | 25,000 | |
Maíz S-12 | 586,5 | 58,650 | |
Total | 1000,0 | 100 | |
Nutrientes (%) | Valor | ||
Peso (kg) | 1,000 | ||
Humedad | 11,071 | ||
E. M. aves KCal/kg | 3 005.940 | ||
Proteína bruta | 19,582 | ||
Grasa | 5,045 | ||
A. G. saturados | 0,352 | ||
A. G. insaturados | 2,123 | ||
Materia seca | 88,929 | ||
Extracto libre de N | 55,508 | ||
Fibra bruta | 2,769 | ||
Cenizas | 6,022 | ||
Calcio | 0,840 | ||
Fósforo disp. | 0,294 | ||
Fósforo total | 0,546 | ||
Cloro | 0,218 | ||
Sodio | 0,123 | ||
Potasio | 0,832 | ||
B. electrolítico meg/kg | 204,709 | ||
Lisina | 1,301 | ||
Metionina | 0,543 | ||
Met + Cist | 0,871 | ||
Treonina | 0,835 | ||
Triptofano | 0,242 | ||
Arginina | 1,376 | ||
Isoleucina | 0,850 | ||
Leucina | 1,707 | ||
Valina | 0,956 | ||
Histidina | 0,547 | ||
Fenilalanina | 1,000 | ||
Fenil & tiro | 1,835 | ||
Glicina | 0,982 | ||
Alanina | 1,107 | ||
Lis Dig Aves | 1,177 | ||
Met Dig Aves | 0,519 | ||
M + C Dig Aves | 0,793 | ||
Tre Dig Aves | 0,736 | ||
Trp Dig Aves | 0,201 | ||
Arg Dig Aves | 1,247 | ||
Ile Dig Aves | 0,765 | ||
Leu Dig Aves | 1,561 | ||
Val Dig Aves | 0,848 | ||
His Dig Aves | 0,481 | ||
Fen Dig Aves | 0,904 | ||
Xantofilas mg/kg | 5,865 | ||
Pellet-Dureza | 5,334 | ||
Pellet | 3,724 | ||
Total soyas | 33,83 |
Toma de muestras
Sacrificio
Durante la fase de experimentación se realizaron sacrificios escalonados de las aves de la siguiente forma: los días 14, 28 y 42 se sacrificaron 20 aves (cuatro aves por tratamiento). Todas las aves fueron sacrificadas 2,5 h después de su última alimentación. Los animales se sedaron por inhalación de nitrox y posteriormente se realizó el sacrificio con dióxido de carbono durante 3 min. Posterior a esto se tomó una muestra de sangre por medio de punción cardíaca.
Se tomó una muestra de sangre (10 ml aprox.) directamente de la vena de cada animal, la cual fue almacenada en tubos de ensayo tapa roja debidamente identificados y centrifugada de inmediato para separar el suero. Las muestras fueron almacenadas a 4 °C hasta la realización de los análisis de laboratorio (glucosa, fosfatasa alcalina y fósforo).
Cuantificación de metabolitos sanguíneos
Los metabolitos evaluados fueron: glucosa, fósforo, fosfatasa alcalina, colesterol, lipoproteínas de baja densidad (LDL), lipoproteínas de alta densidad (HDL), lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) y triglicéridos. La cuantificación en suero se realizó mediante el estuche comercial (DIA.PRO Diagnostic Bioprobes), siguiendo las instrucciones del fabricante. Se utilizaron tres controles negativos (CN), dos calibradores (C) y un control positivo (CP) en cada plato. El punto de corte (cut off [CO]) fue determinado como el promedio de las densidades ópticas a 450 nm (DO 450) de los controles negativos (NC) + 0,35. Los resultados para glucosa en sangre fueron interpretados como la relación entre la DO 450 de la muestra y el CO así: M/CO menor 0,9 negativo, M/CO entre 1,0 y 1,1 indeterminado y M/CO mayor de 1,1 positivos. La medición de las densidades ópticas se hizo usando espectrofotómetro. Las mediciones fueron tomadas los días 14, 28 y 42.
Diseño experimental y análisis estadístico
Se realizó según un diseño bloques al azar en un arreglo de parcelas divididas. A cada animal le fue asignado uno de los 15 tratamientos (cinco dietas experimentales y tres periodos de evaluación). Cada tratamiento tuvo un total de cuatro repeticiones (aves). El análisis estadístico se realizó según el procedimiento PROC MIX GLM del SAS (2017) (11). Las diferencias entre las medias de los tratamientos fueron determinadas por mínimos cuadrados y analizadas por Anova. Para realizar la comparación de los promedios entre tratamientos se utilizó una prueba de Duncan (p < 0,05).
Resultados
En general las aves que consumieron las diferentes dietas presentaron un buen estado de salud y no mostraron ningún síntoma o signo adverso de enfermedad que causara su retiro o sacrificio antes de los periodos de toma de muestras. Adicionalmente, las aves consumieron la ración diaria de alimento ajustada a la guía de manejo de la línea genética Cobb 500 (2012) (12). En este experimento no se encontró interacción estadística entre las diferentes dietas y los días de sacrificio para ninguna de las variables en estudio, por ello no fue necesario desglosar y analizar cada uno de los factores de forma independiente.
Para la variable metabolitos sanguíneos (tabla 2) se presentó diferencia estadística significativa entre las dietas dentro de cada uno de los periodos de muestreo (p < 0,05), en los que las dietas que fueron adicionadas con AEO, específicamente D5 (200 ppm de AEO), presentaron los resultados más significativos para cada una de las variables en estudio. Entre los diferentes días de muestreo, en el día 42 se presentaron los valores más altos para cada dieta en estudio para los metabolitos evaluados (p < 0,05).
D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | EEM | ||||
Fosfatasa (U/L) | 14 | 5280,4 A,X | 6458,3 B,X | 8754,3 C,X | 9561,4 D,X | 9897,3 E,X | 16,45 | ||
28 | 7928 A,Y | 8800 B,Y | 10237,3C,Y | 10322,7D,Y | 10824 E,Y | ||||
42 | 10575,6 A,Z | 11084 B,Z | 11141,7 C,Z | 11720,3 D,Z | 11750,7D,Z | ||||
D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | EEM | ||||
Creatinina (mg/dl) | 14 | 0,332A,X | 0,297B,X | 0,281 C,X | 0,277 D,X | 0,243 E,X | 0,001 | ||
28 | 0,314 A,Y | 0,273 B,Y | 0,256 C,Y | 0,251 C,Y | 0,239 D,Y | ||||
42 | 0,296 A,Z | 0,249 B,Z | 0,235 C,Z | 0,231 CD,Z | 0,225 D,Z | ||||
D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | EEM | ||||
Glucosa (mg/dl) | 14 | 239,5 A,X | 241,8 A,X | 244,5 B,X | 246,9 B,X | 252,4 C,X | 0,266 | ||
28 | 243,7 A,Y | 245,7 A,Y | 249,3 B,Y | 250,7 B,Y | 256,7 C,Y | ||||
42 | 247,9 A,Z | 249,6 A,Z | 254,1 B,Z | 254,5 B,Z | 261 C,Z | ||||
D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | EEM | ||||
Fósforo (U/L) | 14 | 5,93 A,X | 6,04 AB,X | 6,21 B,X | 6,46 B,X | 6,78 C,X | 0,046 | ||
28 | 6,14 A,XY | 6,22 A,XY | 6,58 B,Y | 6,81 C,Y | 7,56 D,Y | ||||
42 | 6,35 A,Y | 6,4 A,Y | 6,95 B,Z | 7,16 B,Z | 8,34 C,Z | ||||
D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | EEM | ||||
Colesterol (mg/dl) | 14 | 152,3 A,X | 147,4 B,X | 144,5 C,X | 139,4 D,X | 130,4 E,X | 0,55 | ||
28 | 146,2 A,Y | 139,3 B,Y | 132,7 C,Y | 126,3 D,Y | 118,5 E,Y | ||||
42 | 139,7 A,Z | 131,2 B,Z | 120,8 C,Z | 113,2 D,Z | 106,6 E,Z | ||||
D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | EEM | ||||
Triglicéridos (mg/dl) | 14 | 53,9 A,X | 44,2 B,X | 41,7 C,X | 39,4 C,X | 36,6 D,X | 0,04 | ||
28 | 51,7 A,XY | 41,3 B,Y | 38,7 BC,Y | 36,7 C,Y | 32,7 D,Y | ||||
42 | 49,5 A,Y | 38,4 B,Z | 35,7 C,Z | 34,0 C,Z | 29,8 D,Y | ||||
D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | EEM | ||||
HDL (mg/dl) | 14 | 83,7 A,X | 86,7 A,X | 90,0 C,X | 94,2 D,X | 97,4 E,X | 0,606 | ||
28 | 88,8 A,Y | 99,2 B,X | 99,2 B,Y | 101,7 B,Y | 107 C,Y | ||||
42 | 93,9 A,Z | 104,2 B,Y | 111,7C,Z | 113,4 CD,Z | 116,6 D,Z | ||||
D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | EEM | ||||
LDL (mg/dl) | 14 | 43,9 A | 39,2 B | 37,7 B | 33,4 C | 31,6 C | 0,397 | ||
28 | 41,6 A | 36,5 B | 33,5 C | 30,7 D | 29,7 D | ||||
42 | 39,3 A | 33,8 B | 29,3 C | 28,5 CD | 26,2 CD | ||||
D1 | D2 | D3 | D4 | D5 | EEM | ||||
VLDL (U/L) | 14 | 11,9 A,X | 9,2 B,X | 8,7 C,X | 8,4 D,X | 8,1 E,X | 0,048 | ||
28 | 10,3 A,Y | 8,8 B,Y | 8,1 C,Y | 7,6 D,Y | 7,2 E,Y | ||||
42 | 8,7 A,Z | 8,4 B,Z | 7,5 C,Z | 6,8 D,Z | 6,3 E,Z |
A, B, C, D, E: Dentro de una misma fila, medias con diferente letra son estadísticamente diferentes (p < 0,05). X, Y, Z: Dentro de una misma columna, medias con diferente letra son estadísticamente diferentes (p < 0,05). EEM = error estándar de la medía.
Para fosfatasa alcalina se presentaron los valores más altos con las mayores inclusiones de AEO (Lippia origanoides). La creatinina fue disminuyendo a medida que se aumentó la adición de AEO (Lippia origanoides); presentó los mayores valores en la dieta basal (D1) y en la dieta que tiene adición de un APC (D2).
En los resultados de glucosa D5 obtuvo los valores más altos en todas las edades y con diferencias significativas estadísticamente (p < 0,05). El fósforo en D3, D4 y D5 presentó diferencia estadística significativa (p < 0,05) entre las edades de muestreo. Los valores más altos de este metabolito se presentaron con el nivel de inclusión creciente de AEO, por lo cual obtuvo valores más altos y, por ende, positivos en la dieta con 200 ppm de AEO (D5).
Para las variables colesterol y VLDL se tuvieron los mejores valores (valores más bajos) en las dietas D4 y D5, las cuales presentaron diferencias estadísticas significativas (p < 0,05) entre sí y con las demás dietas. En los resultados de triglicéridos, D5 presentó diferencias con cada una de las dietas y además presentó los mejores valores de triglicéridos en sangre, puesto que los redujo de forma significativa (p < 0,05) en comparación con las demás dietas.
HDL para el día 28 entre D2, D3 y D4 no presentó diferencias estadísticas significativas (p < 0,05), pero sí entre ellos con D1 y D5. Los valores más deseables en todas las edades fueron presentados por la dieta D5. LDL para los días 28 y 42 no mostró diferencia estadística significativa (p < 0,05) entre D4 y D5. Los mejores resultados fueron obtenidos por las dietas D4 y D5 que presentaron los valores más reducidos de LDL.
Discusión
Según Cunningham y Klein (13), la glucosa es uno de los metabolitos sanguíneos de mayor importancia, ya que es el combustible metabólico básico durante el periodo de nutrición normal de los animales monogástricos y, a su vez, es indispensable para el mantenimiento y aporte continuo en el metabolismo animal. En este trabajo los animales que consumieron D5 (AEO 200 ppm) presentaron los mayores valores de glucosa en sangre, lo cual podría verse reflejado en mejores ganancias diarias de peso y conversión alimenticia. En este experimento el APC (D2) no tuvo efecto significativo (p < 0,05) sobre las variables glucosa con respecto a la dieta basal (D1).
La fosfatasa alcalina es una enzima que aumenta la concentración local de fósforo inorgánico y activa las fibras de colágeno, lo que causa deposición de sales de calcio. En virtud de difusión en sangre, en general, la fosfatasa alcalina es un buen indicador de velocidad de formación ósea (14). Los valores más representativos de la fosfatasa alcalina fueron presentados por la dieta D5 (200 ppm AEO de L. origanoides), superiores a la dieta comercial D2 (APC). Adicionalmente, se muestra un incremento en la fosfatasa alcalina a medida que aumenta la inclusión de AEO. Los resultados son de gran importancia toda vez que la velocidad de crecimiento del pollo actual demanda una mejor formación y estructuración ósea.
El fósforo es un mineral esencial para el metabolismo del organismo animal; desempeña un papel muy importante en el desarrollo y mantenimiento de las estructuras óseas, por lo que es muy importante en avicultura, ya que los pollos tienen un desarrollo muscular muy acelerado, y es primordial que el desarrollo óseo sea acorde con este. El fósforo, además, es un componente del ATP y los ácidos nucleicos, y forma parte de los fosfolípidos que integran y dan flexibilidad a las membranas celulares (15). En este trabajo, D2 tuvo un aumento estadísticamente significativo (p < 0,05) de fósforo en sangre y de fosfatasa alcalina respecto a la dieta basal (D1). Aun así, los resultados obtenidos en D3, D4 y D5 fueron superiores estadísticamente (p < 0,05) a D2, lo que pone a AEO de Lippia origanoides como un precursor de metabolismo y un promotor nutricional de crecimiento de origen natural en los pollos de engorde. En los resultados se observa cómo aumentan de forma progresiva los valores sanguíneos de glucosa, fosfatasa alcalina y fósforo, a medida que se aumentaron las concentraciones de inclusión de AEO de Lippia origanoides. Los valores encontrados se encuentran en los rangos reportados por otros autores en estudio realizado con la misma línea genética (16).
En el organismo, las funciones de HDL son las de aceptar las apolipoproteínas y fosfolípidos de las lipoproteínas degradadas, aceptar el colesterol de los tejidos y de las lipoproteínas, y entregar a estas los ésteres de colesterol para mantener el equilibrio lípido/proteína. Para esto necesita de la fosfolipasa A2 adherida al endotelio capilar y de la lecitina-colesterol aciltransferasa (LCAT); la fosfolipasa A2 actúa sobre los fosfolípidos que transportan las lipoproteínas y la LCAT es necesaria para la conversión del colesterol de HDL a ésteres de colesterol, los cuales son entregados por HDL a LDL y a los remanentes proteicos, y son transportados hacia el hígado y los tejidos extrahepáticos. Así mismo, enzimas como la LCAT y la proteína de transferencia de ésteres de colesterol participan en el transporte inverso del colesterol, pues llevan el colesterol de las paredes arteriales al hígado usando como intermediario la cascada de las VLDL. Además del hígado, las HDL pueden proporcionar colesterol a las glándulas suprarrenales, los ovarios y los testículos (17). Los resultados de colesterol y HDL tienen rangos similares a otros estudios realizados en la misma línea genética (18). Los resultados obtenidos en este estudio pueden indicar unas condiciones metabólicas mejoradas desde el punto de vista del colesterol, HDL, LDL y VLDL, ya que optimiza sus proporciones en sangre, lo que se refleja con una menor propensión a infartos en pollos de engorde, problema que frecuentemente aumenta la mortalidad en las granjas comerciales.
Conclusiones
Con los datos reportados en este trabajo se podría considerar al AEO de Lippia origanoides como un producto natural (fitobiótico) viable para incluirlo en las dietas como mejorador de desempeño en pollos de engorde, ya que presenta efectos positivos en la aceleración del metabolismo, lo que lleva, posiblemente, a una mejora en la optimización de la producción de pollo de engorde.