SÔNIA MARIA FORTI BROGLIO-MICHELETTI¹; ELLEN CARINE NEVES-VALENTE²; LEILIANNE ALVES DE SOUZA³; NIVIA DA SILVA-DIAS⁴; KATHERINE GIRÓN-PÉREZ⁵ y ROSEANE CRISTINA PRÉDES-TRINDADE⁶

¹ Doctor en Entomología. Centro de Ciências Agrárias, Universidad Federal de Alagoas (CECA, UFAL). Campus Delza Gitaí, Rod. BR 104, Km 85, Rio Largo, AL, CEP: 57.100-000. soniamfbroglio@gmail.com. Autor para correspondencia.

² Candidata a maestría, Universidad Federal rural de Pernambuco. carineinicial@hotmail.com.

³ Ing. Agrónoma, CECA, UFAL, Rio Largo, AL. leiliannealves@hotmail.com.

⁴ M. Sc. Entomología. USP-ESALQ. entomologa@ymail.com.

⁵ Doctor en Entomología. DCR, CECA, UFAL, Rio Largo, AL. dias.nivia@gmail.com.

⁶ Doctor en Química y Biotecnologia vegetal Centro de Ciências Agrárias, Universidad Federal de Alagoas (CECA, UFAL). roseane.predes@uol.com.br.

Received: 13-apr-09 - Accepted: 27-sep-09

La garrapata Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini, 1887) (Acari: Ixodidae), es el ectoparasito más importante en áreas de explotación pecuaria, tanto en regiones tropicales como subtropicales, siendo responsable de severas pérdidas económicas. Esa especie, además de causar espoliación sanguínea, lesiona la piel del animal y es el principal transmisor de agentes patógenos para los bovinos (Athayde et al. 2001). El control de R. (Boophilus) microplus es realizado principalmente por medio de aplicación directa de productos químicos, con el objetivo de combatir las etapas parasitarias de la garrapata (Wenzel et al. 2004). El uso indiscriminado de muchos de los garrapaticidas actuales ha aumentado progresivamente los casos de resistencia de este ectoparásito, además de afectar el ambiente y otros organismos, haciendo necesario buscar alternativas urgentes de control (Dunkel y Sears 1998).

Ante esta situación, el control de garrapatas con extractos de plantas, utilizando diferentes métodos de obtención y aplicación, ha sido ampliamente investigado en algunas de las especies de importancia pecuaria (Chungsamarnyart et al. 1991; Williams 1993; Panella et al. 1997; Chagas 2004; Vatsya et al. 2006; Álvarez et al. 2008). Estos acaricidas originados de plantas tienden a tener baja toxicidad, desarrollo lento de problemas de resistencia e inestabilidad en el ambiente, cuyos principios activos se metabolizan rápidamente ante la radiación solar y la humedad microclimática ya que son sustancias más biodegradables que sus contrapartes sintéticas (Morales y García 2000; Iannacone y Lamas 2002).

Los insecticidas de origen vegetal tienen un efecto repelente, disuasivo de la alimentación o de la oviposición y regulador de crecimiento (Coats 1994) y también tienen efecto confuso o disruptor en los organismos expuestos (Metcalf y Metcalf 1992). Además, tienen la ventaja de poseer disponibilidad inmediata y bajo costo, ya que los extractos se pueden preparar mediante tratamientos caseros sin requerir de la utilización de aspersores o implementos costosos. Tales características hacen que los biogarrapaticidas tengan un efecto comercial muy grande, permitiendo controlar R. (Boophilus) microplus de manera menos agresiva al ambiente (Clemente et al. 2007).

Las plantas de la família Meliaceae son las más explotadas por poseer compuestos secundarios encontrados principalmente en las hojas, frutos y semillas. El nim, Azadirachta indica A. Juss, es la especie botánica más estudiada con propiedades pesticidas de alta eficiencia y bajo efecto residual (Aguiar-Menezes 2005). Sus extractos pueden ser utilizados para controlar determinadas especies de garrapatas como Hyalomma anatolicum excavatum Koch, 1844 (Acarina: Ixodidae), Amblyomma americanum (Linnaeus, 1758) (Acarina: Ixodidae) y Dermacentor variabilis (Say, 1821) (Acarina: Ixodidae) (Santos et al. 2006).

En otras especies vegetales, como Cymbopogon citratus (DC.) Stapf (Poaceae), se han encontrado flavonoides, alcaloides y triterpenos, entre otras sustancias, que les confiere propiedades antibacteriales, antifúngicas, insecticidas, diuréticas, anticarcinogénicas, hipotensivas y antiinflamatórias (Silva et al. 2005). Las anonáceas también han sido ampliamente investigadas debido a la caracterización y aislamiento de diversas sustancias con actividad química y farmacológica, principalmente las acetogeninas (Leboeuf et al. 1982). Sin embargo, no existen registros sobre su uso como controlador de la garrapata bovina. Estudios químicos con las hojas de S. malaccensis (L.) (Myrtaceae) resultaron en el aislamiento de cuatro flavonoides: catequina, mearnsitrina, miricitrina y quercitrina. De los frutos se obtuvieron compuestos volátiles; a partir de las flores se aisló la antocianina, 3,5-diglicosílmalvidina y del tallo se aislaron los ácidos elágico, 3-Ometilelágico (Oliveira et al. 2006).

El presente trabajo se realizó con el propósito de evaluar, en condiciones de laboratorio, la mortalidad (%) y el tiempo letal (días) de hembras ingurgitadas de R. (B.) microplus que fueron inmersas por 5 minutos en diferentes extractos vegetales, así como el número de posturas provenientes de las mismas, peso de los huevos (mg), porcentaje de eclosión larval y porcentaje de eficiencia del control.

Los bioensayos se llevaron a cabo en el laboratorio de Entomología del Centro de Ciencias Agrarias de la Universidad Federal de Alagoas (CECA, UFAL) (T. 27,6 ± 1°C H.R 77,4%) localizado en el municipio de Río Largo, AL, Brasil (9°27’S, 35°27’W, altitud: 127 metros) durante los meses de marzo y abril de 2008.

Se utilizaron hojas de A. indica y de C. citratus, semillas de A. muricata y flores de S. malaccensis. Las confirmaciones taxonómicas de estas plantas las realizaron la investigadoras del Instituto del Medio Ambiente (IMA, Maceió, AL), Rosângela Pereira de Lyra Lemos y Maria Noêmia Rodrigues, siendo depositada una muestra de cada planta en el herbario de dicha institución. A. indica (MAC 34904), C. citratus (MAC 34905), A. muricata (MAC 34903), S. malaccensis (MAC 36924).

Todos los extractos se prepararon en el laboratorio de Productos Naturales del Instituto de Química y Biotecnología de la Universidad Federal de Alagoas (UFAL). Los extractos etanólicos de las flores de S. malaccensis y el extracto hexánico de las semillas de A. indica, habían sido preparados en el año 2007 y conservados en nevera (5,0 ± 3,0oC). Después de recolectadas las partes vegetales, se secaron en una estufa con circulación y renovación del aire a 40-45ºC durante 48 horas y en seguida se trituraron en un molino de cuchillas, a fin de obtener un polvo fino. Este polvo se sumergió en alcohol etílico hidratado (92,80 INPM), en la proporción 1:3 (200 g polvo: 1 L solvente) durante 48 horas (T. 27,6 ± 1°C). Transcurrido el tiempo, la suspensión y la evaporación del solvente se realizaron dos veces en un evaporador rotativo al vacío, para extraer la mayor cantidad de principios activos (45°C). Una vez evaporado el solvente, los extractos se almacenaron en la nevera (5,0 ± 3,0°C) para evitar la proliferación de microorganismos.

Los datos se recolectaron a partir del tercer día de establecido el bioensayo; registrando cada tres o cuatro días las primeras eclosiones larvales, la mortalidad de las hembras, el tiempo letal, el número de oviposiciones, el peso de los huevos y el porcentaje de eclosión (14 días después de la ultima pesada de la postura) a través de una escala de notas que varió de cero (ausencia de larvas) a cuatro (100% de eclosión) y eficiencia del producto. Se realizó un análisis de variancia y las medias se compararon por el test de Tukey (P < 0.05). Los análisis estadísticos fueron realizados a través del programa Sanest (1994). Para calcular la eficiencia del producto (EP) se utilizaron las ecuaciones preescritas por Drummond et al. (1973).

La mortalidad de las teleóginas osciló entre 5 y 100% (F_10.918; df = 6; P < 0.00006), alcanzando valores estadísticamente iguales para las hembras tratadas con extractos de flor de S. malaccensis y semillas de A. muricata, siendo los tratamientos más promisorios en el control de las hembras de la especie (Tabla 1). En relación con tiempo letal, transcurridos tres días después de la inmersión de las hembras (DDI), el extracto de flor de S. malaccensis y de semillas de A. muricata tuvieron porcentajes de eficiencia de 30% y 60% respectivamente, difiriendo de los demás tratamientos. A los seis DDI, A. muricata tuvo 25% de eficiencia en el control, difiriendo también de los demás tratamientos (Tabla 2). A los 10, 13, 17 DDI no se presentaron diferencias entre los tratamientos (F_19.112; df = 6; P < 0.00001). Sin embargo, a los 21 días DDI, el extracto hexánico de semillas de A. indica tuvo una eficiencia de 50%, logrando un total el 65% de las hembras muertas entre los 10 y 21 días. En los grupos testigo, las primeras muertes se reportaron a partir del día 13 DDI. El extracto etanólico de las hojas de C. citratus (1%) fue el menos eficiente con porcentajes de mortalidad de 45% de las teleóginas tratadas; sin embargo, cuando Heimerdinger et al. (2006) analizó la eficiencia de extractos alcohólicos obtenidos a partir de la maceración de raíces, rizomas, tallos y hojas de la misma planta, en R. (B.) microplus, concluyó que la solución que contuvo 2,72% de A. malaccensis redujo la infestación del parásito en 40,33; 46,56; 41,46% en los días tres, siete y 14 pos-tratamiento, respectivamente.

Con relación a la oviposición, el extracto de A. muricata redujo sustancialmente el número de posturas (F51.0528; df = 6; P < 0.00001). En cuanto al peso medio de los huevos, aquellos tratados con A. muricata difirieron de los demás (F_16.7996; df = 6; P < 0.00001), registrando el menor peso (Tabla 1). Borges et al. (2003) al evaluar extractos de Melia azedarach L. (Meliaceae) al 0,25% observaron, “in vitro”, total inhibición de la oviposición de hembras ingurgitadas sumergidas en extracto bruto de frutos maduros obtenido con diferentes solventes, verificando así, alta tasa de mortalidad de larvas, inhibición total o parcial en la producción de huevos y la embriogénesis, sin matar las hembras adultas que generaron dicha prole. El extracto de semilla de A. muricata, fue el único que difirió de los demás tratamientos, en relación con la eclosión larval (F_46.999; df = 6; P < 0.00001) (Tabla 1). A pesar del buen desempeño del extracto de A. muricata, no existen registros literarios de la influencia de las acetogeninas o de las anonaceas en la eclosión de larvas de R. (B.) microplus.

El extracto de hoja de A. indica fue el menos promisorio (2,25%), contraponiéndose al extracto de la semilla de A. muricata, el cual fue 100% eficiente (F_19.1129; df = 6; P < 0.00001). Según Aguiar-Menezes (2005), la azadirachtina inhibe la biosíntesis de la hormona protoracicotrópica (PTTH) y como consecuencia no permite la síntesis de las hormonas responsables de ecdisis y maduración de huevos. Los extractos de la flor S. malaccensis (57,25%), así como de A. indica fracción hexánica (38,50%), obtuvieron resultados sin diferencias estadísticas al compararlos con los extractos de hoja de A. indica. Martins y González (2007) trabajando con aceite esencial de Cymbopogon winterianus Jowitt (Panicoidideae) “in vivo”, aplicado puro y directamente en la línea dorsal del ganado infestado (via pour on) y vía aspersión (diluyendo el aceite en alcohol en la proporción 1:10), observaron que ambos tratamientos fueron altamente eficientes en el control el ácaro sin ser tóxico para los animales, diferente a lo observado en este bioensayo, donde C. citratus, planta del mismo género botánico, solo controló 16,25% de los individuos expuestos en condiciones de laboratorio. Valente et al. (2007) compararon “in vivo” la eficacia del extracto acuoso de hojas frescas de A. indica (1 kg de hojas frescas: 5 L de agua), aplicado semanalmente a través de baños (2 L/animal) durante un mes, con la eficiencia de la amabectina en aplicación única dorsal para controlar B. microplus. Ellos constataron que no hubo diferencia estadística en los porcentajes de infestación entre ambos tratamientos, llegando a sustituir la amabectina por el extracto vegetal dentro de un programa zootécnico de control de garrapatas en la región semi-árida de Brasil.

Sousa et al. (2008) evaluaron extractos aceitosos hexánicos de frutos verdes y maduros de Melia azedarach, en diluciones de 0,125% y 0,25%, sobre hembras ingurgitadas y larvas de garrapata bovina, observando que el extracto de frutos verdes obtuvo valores de eficiencia entre 88,9% a 100%, y con los frutos maduros, valores entre 54,8% a 99,7%. Los dos extractos ocasionaron 100% de mortalidad en las larvas en las concentraciones más altas. Los resultados demuestran una superioridad del extracto verde, con una menor DL₅₀ y una potencia 1.497 veces superior al extracto de frutos maduros.

El extracto de semillas de A. muricata es el producto más adecuado para controlar hembras de R. (B.) microplus, ya que, además del alto índice de mortalidad y rápido efecto sobre las hembras ingurgitadas es más eficiente, es decir, reduce acentuadamente la oviposición de las teleóginas, así como la eclosión larval. Sin embargo, para que el extracto de semillas de A. muricata 1% sea recomendado para controlar R. (B.) microplus, es necesario realizar nuevos estudios “in vivo” para validar su eficiencia en condiciones de campo así como sus posibles efectos en el ganado

Los autores agradecen a las siguientes entidades: FINEP (Financiadora de estudos e projetos), SECT (Secretaria de Estado de Ciência e Tecnologia), FAPEAL (Fundação de Amparo a pesquisa do estado de Alagoas) y a CNPq (Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico) por la financiación del proyecto.