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Biomédica
versão impressa ISSN 0120-4157versão On-line ISSN 2590-7379
Resumo
FLORES, Byron et al. Evaluación de tres PCR cuantitativas para la detección de leptospiras patógenas en animales domésticos en Nicaragua. Biomed. [online]. 2020, vol.40, n.4, pp.673-681. Epub 10-Dez-2020. ISSN 0120-4157. https://doi.org/10.7705/biomedica.5170.
Introducción.
En Nicaragua es necesario estandarizar pruebas moleculares como la PCR en tiempo real (quantitative Polymerase Chain Reaction, qPCR) que mejoren el diagnóstico de leptospirosis en humanos y animales.
Objetivo.
Evaluar tres qPCR para la detección de leptospiras patógenas en animales domésticos de Nicaragua.
Materiales y métodos.
Se diseñaron cebadores para la amplificación del gen LipL32 en SYBR Green (SYBR Green-A) y TaqMan, y en otros descritos previamente (SYBR Green-B). Las secuencias de 12 cepas obtenidas de la base de datos del National Center for Biotechnology Information (NCBI) se alinearon para la búsqueda de sondas y cebadores. La sensibilidad analítica se determinó calculando el equivalente genómico detectable, se utilizaron 18 cepas de referencia para la sensibilidad diagnóstica y 28 controles negativos para la especificidad. Los métodos se aplicaron en 129 muestras de orina de animales domésticos.
Resultados.
En SYBR Green-A se obtuvo un límite de detección de cuatro equivalentes genómicos; en TaqMan, la sensibilidad fue del 94,4 % (IC95% 81,1-100,0). Con SYBR Green-A, se obtuvo una sensibilidad del 77,8 % (IC95% 55,8-99,8), en tanto que con SYBR Green-B fue del 61,1 % (IC95% 35,8-86,4). En las tres pruebas se logró una especificidad del 100 % (IC95% 98,2-100,0). El 26,4 % de las muestras de animales domésticos fueron positivas con SYBR Green-A y el 6,2 % con SYBR Green-B.
Conclusiones.
El SYBR Green-A presentó un límite de detección bajo, en tanto que las tres técnicas evaluadas mostraron alta especificidad, en tanto que la TaqMan tuvo la mayor sensibilidad.
Palavras-chave : Leptospira; leptospirosis/diagnóstico; reacción en cadena de la polimerasa; animales domésticos; Nicaragua.