Resumo

MESA-RESTREPO, Andrea; FERNANDO-ALZATE, Juan  e  PATINO-GONZALEZ, Edwin Bairon. Proteína morfogenética de hueso 2: expresión heteróloga y potencial en la regeneración ósea. Actu Biol [online]. 2021, vol.43, n.114, e1.  Epub 21-Jan-2022. ISSN 0304-3584.  https://doi.org/10.17533/udea.acbi.v43n114a01.

Actualmente la proteína morfogénica ósea 2 (BMP-2) es uno de los dos factores de crecimiento más osteoinductivos usado clínicamente en dispositivos médicos que promueve la formación de hueso. Normalmente esta proteína es comprada a altos precios y en cantidades pequeñas que no alcanzan a cubrir las necesidades clínicas. Debido a esto, se ha propuesto que centros de investigación utilicen sus propios sistemas heterólogos para obtener un suministro constante. El objetivo de este trabajo es estandarizar la expresión heteróloga de la BMP-2 y evaluar su actividad osteoinductiva in vitro. Nuestro procedimiento para la expresión y purificación se basó en la tecnología de DNA recombinante usando el plásmido pET-28 e IPTG como inductor. Después de extraer la proteína de los cuerpos de inclusión, renaturalizarla y modificarla usando un sistema redox, se observó mediante electroforesis un dímero de 26 kDa. Se evaluó su actividad osteoinductiva en células mioblásticas C2C12 cuantificando enzimáticamente la actividad de la fosfatasa alcalina (ALP) y realizando una tinción de los nódulos de mineralización. La actividad de la fosfatasa alcalina fue proporcional a la concentración de BMP-2, obteniendo un aumento del 90% a concentraciones de 3 µg/mL. Estas células formaron nódulos de calcio, mineralizando un 50% la superficie.

Palavras-chave : Células C2C12; Fosfatasa alcalina; Renaturalización; rhBMP-2.

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