INTRODUCCIÓN

La equinococosis es una enfermedad zoonótica inducida por parásitos del género Echinococcus. Los carnívoros son los huéspedes definitivos del parásito; y varios mamíferos, incluidos los humanos, son sus huéspedes intermediarios ¹. Según la nomenclatura actual, la enfermedad tiene tres nombres; Equinococosis Quística (CE), Equinococosis Alveolar (AE) y Equinococosis Neotropical (NE) ². La Equinococosis Quística es causada por E. granulosus; la Equinococosis Alveolar es causada por E. multilocularis, la Equinococosis Neotropicales causada por E. vogeli y E. oligarthus. CE incluye los perros domésticos y otros perros como huéspedes definitivos y ungulados (principalmente ovinos y bovinos) como huéspedes intermedios. Además, los cánidos salvajes (como lobos, coyotes y zorros rojos), las ovejas salvajes y las gacelas con bocio desempeñan un papel en el ciclo de vida del parásito ³. Los huéspedes definitivos de AEson los cánidos especialmente los zorros; y los huéspedes intermedios son los especies de roedores ⁴. AE es una enfermedad muy grave y es una razón notablade la pérdida de vidas humanas en Asia. La CEes una carga enorme para la salud humana y causa las pérdidas económicas debido a la endemicidad y prevalencia de la enfermedad, pero no tan patógena como la AE ⁵.

La especie adulta de Echinococcus vive en el intestino del cánido y los huevos del parásito se excretan en las heces del cánido ^5,6. Los huéspedes definitivos se infectan al ingerir protoscólices vivos. La producción de huevos comienza después de 34 a 58 días en E. granulosus, mientras que comienza después de 28 a 35 días en infección por E. multiocularis⁷. La vida de los gusanos adultos puede ser de dos años o más. Las ovejas, el ganado vacuno, los cerdos y los humanos se infectan al ingerir fecal-oral a través de los huevos arrojados al medio ambiente con las heces de los caninos infectados ¹. La oncosfera en el huésped intermedio está unida a las vellosidades ⁸. La oncosfera viaja a través de los vasos sanguíneos o linfáticos a órganos tales como el hígado y los pulmones o, con menos frecuencia, a otros órganos; y se desarrolla la etapa de metacestodo del parásito ⁵. Los CE, ue se desarrollan principalmente en órganos internos tales como el hígado y el pulmón, son uniloculares, agrandadas, llenas de líquido y rodeadas por una pared de quiste de dos capas ⁹. El metacestodo (quiste hidatídico) está formado por una capa fina interna germinativa multinucleada y una capa gruesa externa laminada acelular ¹⁰. La capa germinal forma cápsulas de cría y brota hacia su interior para generar protoscólices. Con la transformación de proscoleces en vesículas se convierten en vesículas hijas que viven en el líquido del quiste ¹⁰. Las vesículas hijas se pueden convertir en un nuevo quiste o en un parásito adulto ¹⁰. La longitud del cuerpo, la apariencia de los ganchos rostellares y las características de la estróbila varían según la especie en los gusanos Echinococcus adultos. Estas características morfológicas se utilizan para distinguir las especies de Echinococcus⁶.

Turquíase define como una región altamente endémica para E.granulosus y E.multilocularis^11,12. La equinococosis quística (CE) causa un importante problema de salud pública en algunas regiones ¹³. La enfermedad puede progresar sintomáticamente o asintomáticamente en humanos, dependiendo de la órgano donde se encuentra el parásito, la ubicación del quiste en el órgano, su tamaño, la respuesta inmunológica de la persona y la sensibilidad de los quistes a las infecciones secundarias ¹⁰. Muchas veces la CE en perros y huéspedes intermediarios es asintomática ¹². Habitualmente, los quistes no provocan síntomas clínicos hasta que alcanzan un cierto tamaño. Si los quistes crean presión sobre el tejido vecino, la CE puede convertirse en sintomática o puede causar otros eventos patológicos ¹⁴. Mientras que la fiebre, la ictericia, las náuseas, los vómitos y el dolor en el lado derecho del abdomen se pueden observar en la enfermedad hepática, tos, dolor en el pecho, y la anafilaxia debido a la ruptura peritoneal que se puede ver en casos de pulmón ¹². En los seres humanos, la CE generalmente ocurre en un solo órgano (generalmente los pulmones o el hígado); sin embargo, la afectación multiorgánica o de múltiples quistes se puede encontrar en el 2040% de los casos ¹².

Existen varios métodos para el diagnóstico de equinococosis en huéspedes intermediarios. La necropsia es un método adecuado para mantener a la población libre de infección; contribuir a las políticas de erradicación; confirmar casos clínicos y determinar la prevalencia de la infección. El otro método, PCR, es más adecuado para confirmar y genotipificar ¹⁵. Los experimentos sobre el diagnóstico serológico de la equinococosis en ovejas hospedadoras intermedias han demostrado que las pruebas serológicas no pueden reemplazar la necropsia ¹⁶. Se recomienda implementar programas de control en los países donde la equinococosis es endémica ^12,17,18. Estos programas de control deben incluir información sobre la prevalencia, la especie y el género del parásito en los animales de carnicería y la edad de los animales expuestos. Las tasas de prevalencia en el huésped intermedio mayormente dependen de la edad. Los rumiantes mayores pueden infectarse gravemente incluso cuando tienen pocas larvas ¹⁶.

En nuestro estudio, nuestro objetivo fue evaluar retrospectivamente el estado de equinococosis quística de los animales de granja enviados al Instituto de Control Veterinario de Samsun entre el Enero de 2016 y el Diciembre de 2022.

MATERIALES Y MÉTODOS

Ética. El estudio cumplió con la Declaración de Helsinki, revisada en 2013, y no se obtuvo la aprobación del comité de ética por ser un estudio retrospectivo. No se requiere la aprobación del comité de ética para tales estudios.

Animales. El estudio se llevó a cabo entre el Enero de 2016 y el Diciembre de 2022 en nueve provincias (Sinop, Samsun, Amasya, Tokat, Sivas, Ordu, Giresun, Trabzon, Rize) en el Instituto de Control Veterinario de Samsun. En el estudio, se evaluaron órganos (pulmón, hígado, bazo, riñón, corazón) de 1968 animales (818 ovinos, 160 caprinos y 990 bovinos) enviados a nuestro Instituto para Equinococosis. Los órganos sospechosos de equinococosis se examinaron parasitológicamente y patológicamente.

Análisis parasitológico. El examen parasitológico se realizó de acuerdo con el Manual Terrestre de la OIE, Capítulo 3.1.6 ¹⁶. Los órganos se palparon y recortaron para su examen. Los órganos que contienen quistes tienen hinchazón y, a veces, firmeza. Se hicieron incisiones en los quistes blanquecinos, mates, fluctuantes o de consistencia dura; y se extrajo todo el líquido del quiste para un examen microscópico. Al observar la capa germinal, se tomó la decisión de positividad de CE ¹⁶.

Análisis Histopatológico. Las muestras de órganos se fijaron en 10% de formaldehído para el examen patológico. Luego, se prepararon los bloques de parafina de los tejidos fijados. Las tinciones con hematoxilina-eosina y ácido peryódico de Schiff (PAS) se realizaron tomando las secciones de 5 mm de espesor de los bloques embebidos en parafina (FFPE), fijados en formalina. Las secciones teñidas se cubrieron con entellan y se examinaron bajo un microscopio óptico. La decisión sobre la positividad de CE se tomó observando la capa laminar acelular positiva para PAS con o sin una membrana germinal nucleada, celular interna ^16,19,20.

Análisis estadístico. Los análisis estadísticos se realizaron con el paquete de programas SPSS versión 23. Todos los datos se registraron en el paquete de programas SPSS versión 23 y la relación estadística entre las tasas de prevalencia se evaluó con la prueba de Pearson-Chi-Square.

RESULTADOS

Resultados parasitológicos. Entre el 2016 y el 2022, el material de necropsia perteneciente a 1968 animales de granja (818 ovejas, 160 cabras y 990 bovinos) se examinó macroscópicamente e histopatológicamente para detectar la presencia de quistes de CE. El número total anual de animales infectados y no infectados por especie de animal se presenta en la tabla 1.

Tabla 1 Distribución de los casos de quistes de Echinococcus en especies rumiantes por años. 

Los registros de los órganos en los que se detectaron los quistes en un total de 61 casos se presentan en la tabla 2. Los quistes se encontraron en al menos uno de los pulmones e hígado. En 24 de los casos (39.3%) se encontró en el hígado; en 23 de los casos (37.7%) se encontró en el en pulmón; y en 11 de los casos (18%) se encontró tanto en el pulmón como en el hígado. Además, en 1 caso, los quistes se encontraron en el pulmón y el bazo; en un otro caso los quiestes se encontraron en el riñón y el hígado. También, en 1 caso, los questes se encontraron en el corazón y el hígado. Según la especie animal, la tasa de infección total fue el 5.3% (44/818) en ovinos, el 3.75% (6/160) en caprinos y el 1.1% (11/990) en bovinos.

La tasa de positividad fue mayor en oveja que otros rumiantes; y la diferencia con otras especies de rumiantes fue estadísticamente significativa (p<0.001, Tabla 3).

Tabla 3 Evaluación estadística de la distribución de los casos de quistes de Echinococcus según especies de animales. 

La prevalencia promedio, que se encontró entre el 2016 y el 2022, fue el 3.1%. La tasa más baja fue el 1.1% en el 2018; la tasa más alta en el 2016 fue el 6.5%. La diferencia entre las tasas de prevalencia por años se encontró como estadísticamente significativa (p=0.004, Tabla 4).

Resultados histopatológicos.

Histopatológicamente, las formaciones quísticas en hígado y protoescólices se observaron en el contenido del quiste (Figura 1A). Se determinó que; habíanlas células gigantes de cuerpo extraño, la infiltración celular y la cápsula fibrosa contra la pared del quiste (Figura 1B). Además, algunos cambios degenerativos se observaron en los hepatocitos. Se encontraron quistes hidatídicos y protoescólex en el tejido pulmonar (Figura 1C). Se encontró infiltración celular contra la pared del quiste (Figura 1D). Además, se determinó hiperemia e infiltración de células mononucleares en el tabique interalveolar del pulmón. Se observó que;en algunas muestras, no había ningún protoescólex en la cavidad de quiste de las muestras y calcificaciones en la pared del quiste.

Figure 1 A) Protoescólex en el contenido del quiste en el hígado (flecha negra). Hematoxilina-eosina (HyE). Barra: 500 pm. B) Célula gigante de cuerpo extraño y cápsula fibrosa (flecha negra) en la pared del quiste, quiste hija (flecha roja). Hematoxilina-eosina (HyE). Barra: 500 pm. C) Capa laminar y capa germinal (barra) y área inflamatoria (flecha negra) en el pulmón (barra).Hematoxilina-Eosina (HyE). Barra: 200 μm. D) Infiltración inflamatoria contra la pared del quiste en el pulmón (puntas de flecha) y capa laminar y membrana germinal (varilla). Tinción con ácido peryódico de Schiff (PAS). Barra: 500 μm. 

DISCUSIÓN

La equinococosis es una causa importante de pérdidas económicas en las industrias de animales de granja, especialmente ovinas y bovinas ¹³. Existen dos huéspedes en el ciclo de vida del parásito: el primero es el "huésped primario" o huésped definitivo carnívoros (caninos o felinos);y el segundo es el "huésped intermedio" herbívoros u omnívoros donde se ocurre la enfermedad ²¹. Las infecciones clínicas causadas por formas larvarias de especies de Echinococcus son responsables de la morbilidad y mortalidad en los huéspedes intermedios, incluidos los seres humanos.

En Turquía, la CE ha sido una enfermedad de notificación obligatoria en los seres humanos desde 2005. La notificación no es obligatoria en los perros huéspedes finales y los rumiantes huéspedes intermediarios. Se recomienda por el Ministerio de Salud de Turquía a incluir la enfermedad en la categoría de notificación obligatoria en animales. En una evaluación reciente de la enfermedad, se piensa que la prevalencia de CE en nuestro país se puede reducir al 5% y tomar bajo control ¹². En nuestro estudio, nuestro objetivo fue determinar la presencia de ec y la distribución de quistes en los órganos de los animales de granja criados en las provincias del norte de Turquía.

En nuestro estudio, nosotros encontramos quistes de CE en un 5.3% en ovejas; un 3.75% en cabras y un 1.1% en bovinos. Un estudio que evaluó la prevalencia de hidatidosis en rumiantes en Karbala, Irak, encontró que; el 1.84% del ganado bovino, el 1.9% de las ovejas y el 2,4 % de las cabras estaban infectados con quistes hidatídicos ²². En un estudio realizado en Pakistán, el 45.45% de los bovinos, el 60.46% de los búfalos, el 20% de los ovinos y el 20% de los caprinos encontraron positivos para E. granulosus genotipo G1 ²³. La prevalencia de CE en Túnez fue de 16.42% en ovinos, 8.56% en bovinos, 5.94% en dromedarios y 2.88% en caprinos ²⁴. En Peloponeso, Grecia, la prevalencia de CE se determinó como el 30.4% en ovinos y el 14.7% en caprinos ²⁵. Mientras que la tasa de CE está entre el 1% y el 7% en ovejas de Bulgaria, España y Rumania; la tasa de prevalencia reportada en Austria y Alemania está por debajo del 1% ²⁶. En nuestro país, en la provincia de Van, ²⁷ se detectaron quistes hidatídicos en el 46.4% de los ovinos y el 38.5% de los bovinos. Se detectó CE en el 11.26% de los bovinos de la región de Ordu y en el 14.86% de los bovinos de la región de Erzurum ²⁸. Además, se detectó CE a una tasa del 4.4% en bovinos y el 6.36% en ovinos en Ordu y las ciudades aledañas ²⁹. En nuestro estudio realizado en las provincias del norte de Turquía, similar a otros estudios realizados en nuestro país , una tasa más alta de CE se encontró en ovinos que en bovinos (p<0.001). La razón puede ser que; los quistes encontrados no fueron enviados a nuestro Instituto para su diagnóstico y confirmación porque macroscópicamente eran bien conocidos; o que el ovino y el perro interactuaban más cerca. En nuestro estudio, la tasa más baja de CE, que se encontró, fue el 1.1% en 2018 y la tasa más alta fue el 6.5% en 2016 (p=0.004). Esto contribuirá a los estudios a realizar para determinar la presencia de CE en rumiantes.

En el estudio, nosotros detectamos CE en el pulmón del 37.7% de los rumiantes; además de detectarlo en el pulmón y el hígado del 18% de los ruminantes; y en el hígado del 39.3% de los rumiantes. En un estudio realizado en Kenia, se detectó CE en el hígado del 56% de los bovinos, el 70% de los ovinos y el 65% de los caprinos³⁰. En Marruecos, se detectaron quistes hidatídicos tanto en el hígado como en los pulmones del 49.6% de los bovinos y el 52.1% de los ovinos infectados ³¹. En la provincia de Kirikkale deTurquía, el 3.2% de los corderos y el 50.9% de los ovinos tenían CE; el 51.8% de los ovinos y los corderos tenían de 1 a 10 quistes en el hígado; y el 64.7% de los mismos los tenían en sus pulmones; y el número promedio de protoscólex viables fue de 12.400 y 5.800, respectivamente ³². Los quistes que no contienen protoscólex se consideran como no infecciosos para los huéspedes definitivos ^16,33. En este estudio, en algunos quistes no se observó ninguna estructura de protoscólex,en los exámenes realizados en los bloques de FFPE. Además, algunos de ellos fueron encontrados como calcificados. Sin embargo, esto no significa que los animales de los que se recolectan las larvas no son infecciosos.

Aunque la determinación de cepa y especie en los quistes hidatídicos se puede hacer de los bloques de FFPE; se debe hacer de las muestras de líquido de quiste vivo y de la pared del quiste que contienen capa germinal, que no se colocan en ningún fijador ^20,34. Como resultado de la PCR y el análisis de secuencia de los quistes de 101 hidatídicos y los quiestes de 5 alveolares obtenidos de los humanos en la región de Erzurum, donde la enfermedad tiene un curso endémico alto, ; se ha informado que el 97% de los 101 quistes hidatídicos son de genotipo G1 y el 3% de los mismos son de genotipo G3 ³⁴ we confirmed Echinococcus multilocularis cases, searched genetic variations of the isolates, and-for the first time-determined the genotypes of Echinococcus granulosus s.l. infecting humans in the province. A total of 5 alveolar and 106 hydatid cysts as well as 23 formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE. Este estudio no se realizó para la determinación de especies y cepas, y la equinococosis quística se juzgó a base de la información del huésped intermedio, las estructuras de protoescólex, la capa laminar positiva-PAS y la capa germinal.

El estudio no tenía datos sobre la edad de los animales condenados a Equinococosis, la viabilidad de los quistes y las especies de Echinocoocus diagnosticadas retrospectivamente. Sin embargo, epidemiológicamente, esta información tiene importancia vital ¹⁶. En todos los animales, los quistes aparecen después de algunos meses, y se ha informado que la prevalencia de CE es mucho mayor en los animales mayores que en los animales jóvenes. Además, se sabe que la CE es una enfermedad crónica y su incidencia aumenta con la edad ^16,30. Existe una necesidad de conducción de estudios sobre el genotipado de CE en rumiantes y el modelado de la frecuencia de edad.

Se cree que las razones principales de la gran cantidad de casos de Equinococosis en Turquía son los sacrificios sin control, los mataderos/ plantas de procesamiento de carne inadecuados y la abundancia de perros callejeros ³³. Con el reglamento publicado en este contexto (reglamento númerado: 27.11.2011/28155), se dio tiempo para la modernización y renovación de los mataderos ³⁵. Actualmente, hay 1286 mataderos aprobados en Turquía, y estos mataderos se inspeccionan regularmente tanto en términos de HACCP como en términos de condiciones técnicas e higiénicas ³⁶.

En un estudio reciente , que cubre dos importantes ciudades del oeste de Turquía , se determinó la existencia de mataderos que aún se encuentran en el proceso de modernización, y se reportó que el 14,08% de estas plantas procesadoras de carne contaban con laboratorios ³⁷. En el mismo estudio, se reportó que el 50.70% de las empresas que operan en la industria de la carne roja y el procesamiento de carne tienen el certificado de ISO 22000; el 33.80% de los mismos tienen el certificado de ISO 9001; y el 9.86% de los mismos tienen el certificado de ISO 14000. Cabe destacar en el estudio que el porcentaje de empresas con certificado de ISO 14000 (sistema de gestión ambiental) es bajo ³⁷. Con respeto a la gestión de los residuos de matadero; el Ministerio de Agricultura y Silvicultura de Turquía ha publicado un reglamento numerado: 24.12.2011/28152. Según este reglamento, los desechos de matadero (subproductos de animales) en la Categoría II pueden ser destruidos por incineración, enterrando en un relleno sanitario (pozo muerto), o incinerando directamente después del procesamiento con esterilización a presión ³⁸. Sin embargo, quemar cadáveres o partes del cuerpo de animales muertos es costoso e inadecuado según la legislación ambiental. En este contexto, el desarrollo de mataderos solo como infraestructura física tendrá un impacto limitado en la salud humana y el medio ambiente. La destrucción de animales muertos o carnes y productos cárnicos, que no son adecuados para el consumo, seguirá siendo un problema de salud pública a menos que se procure dotar al personal capacitado con los conocimientos técnicos que necesitan los mataderos y se realicen inspecciones periódicas sobre el manejo de los residuos de los mataderos.

En conclusión, la CE sigue siendo un grave problema de salud pública en Turquía. Considerando que un perro infectado puede infectar a muchos animales de granja y a los humanos; es importante tomar medidas preventivas y de control. Para ello, es esencial a controlar la población canina; mantener las inmediaciones del matadero y los pozos muertos aislados de perros y animales salvajes; y aumentar la concienciación del personal del matadero y de las granjas sobre la enfermedad. Es claro que se requiere más investigación sobre el estado actual de la CE en Turquía. Se espera que los resultados presentados en este estudio sean un recurso para futuros estudios en Turquía. Nosotros creemos que; será útil a tener en cuenta los temas mencionados anteriormente en la planificación de los estudios futuros.