Localidades

Se evaluaron 12 fincas escogidas aleatoriamente en el municipio de El Espinal (4°08′55″N 74°52′55″O) dentro del ecosistema de trópico bajo y en los municipios de Cajamarca (4°26′12″N 75°25′40″O) e Ibagué (4°26′16″N 75°12′02″O) ubicados en ecosistema de trópico medio del Tolima (Figura 1), municipios cuyo inventario bovino totaliza 58.352 cabezas de ganado distribuidas en 2.159 fincas (^{ICA, 2018}). El tamaño de muestra fue determinado según ^{Abad & Servín (1978)}, tomando un nivel de confianza del 95%, un margen de error del 10% y un valor p = 0,95 basándose en niveles de resistencia a químicos en R. microplus reportados anteriormente. Esta muestra fue estratificada de acuerdo con un índice obtenido entre la población bovina total y el número de predios por municipio, por lo cual se escogieron cinco predios en Cajamarca, cuatro predios en Ibagué y tres predios en El Espinal. Al inicio del estudio se realizó una corta encuesta en cada una de las fincas a fin de determinar características tales como tamaño de la población bovina, razas presentes, tipo de producción, condiciones ambientales, planes sanitarios de control de garrapatas, historial del uso y frecuencia de tratamiento. La ubicación geográfica de los municipios se observa en la figura 2.

Figura 2 Ubicación geográfica de los tres municipios donde se realizó el estudio (^{Sociedad Geográfica de Colombia, 2015}). 

Colecta de especímenes

En cada finca se colectaron teleoginas (hembras repletas de sangre) de R. microplus desprendiendo cuidadosamente de forma manual los especímenes presentes en cada flanco de al menos cinco bovinos infestados (Andreotti et al., 2011). Las garrapatas se transportaron en recipientes plásticos con suficiente ventilación hasta el Laboratorio de Parasitología Veterinaria de la Universidad del Tolima donde se seleccionaron los individuos para el estudio que presentaran un tamaño mínimo de 7 mm, coloración marrón uniforme y cuerpo con todas sus estructuras, se realizó la identificación taxonómica a través de características morfológicas de la especie (^{USDA, 1976}) y se desarrollaron los protocolos para la prueba biológica.

Prueba de Inmersión de Adultas (AIT) modificada

Para analizar la susceptibilidad de los especímenes se realizó la prueba PIA (^{Drummond et al., 1973}) con modificaciones como: Se usaron dosis comerciales, el volumen final de solución stock de inmersión fue de 100 ml, el tiempo de inmersión fue de tres minutos, la masa de huevos se pesó a los 14 días, el porcentaje de eclosión se estimó a los 20 días y se hicieron dos réplicas. De esta manera se utilizaron hembras ingurgitadas con un peso mínimo de 150 mg. Los principios activos utilizados fueron: etión 840 ppm, cipermetrina 150 ppm, y amitraz 208 ppm, en presentaciones comerciales y diluidas de acuerdo con las recomendaciones del fabricante para su uso en campo. Es decir, se diluyó 0.1 ml de cada uno de los productos en 100 ml de agua destilada, manteniendo la recomendación de la casa comercial de dilución de 1 ml en 1 litro de agua. También se evaluó ivermectina inyectable 10 ppm, preparada según ^{FAO (2004)} diluyendo 0.1 ml del producto en 9.9 ml de etanol al 1% y Tritón X-100 al 0.02%.

Se establecieron cuatro grupos tratamiento, uno por cada acaricida, y un grupo control solo con agua destilada; al evaluar diez hembras por grupo con dos réplicas por tratamiento. Las teleoginas se sumergieron por tres minutos en 100 ml de solución acaricida diluida a la concentración respectiva en agua destilada. Las teleoginas del grupo control se sumergieron solamente en agua destilada. Luego se secaron con papel absorbente y se ubicaron en cajas de Petri en posición decúbito dorsal adhiriéndolas con cinta adhesiva doble faz para su monitoreo bajo condiciones de laboratorio en una estufa de incubación a 28°C y 80% de humedad relativa durante 14 días (^{Díaz & Vallejo, 2014}).

Posteriormente, se pesó la masa total de huevos del grupo de 10 garrapatas que ovopositaron, en cada uno de los tratamientos acaricidas y el control, se depositó en tubos de ensayo de 10 ml con un tapón de algodón para permitir la oxigenación y se dejó en incubación a 28 °C y 80% de humedad (^{Díaz, 2016}). Al cabo de 20 días se estimó el porcentaje de eclosión realizando tres conteos aleatorios de 200 estructuras cada uno entre huevos y cascarones por cada grupo evaluado (^{Furlong, 2002}).

Estimación de la eficacia acaricida

La eficacia para cada acaricida se obtuvo comparando la reproducción estimada (ER) de todos los grupos de garrapatas tratadas con la ER del grupo control, tomando como parámetros de medida el peso del grupo de teleoginas, el peso de la masa de huevos y el porcentaje de eclosión, realizando el cálculo con la siguiente fórmula (^{Drummond, 1973}):

* Constante que indica el número estimado de huevos por gramo en R. microplus.

A continuación, la ER obtenida de cada grupo tratado se comparó con la del grupo control para calcular el porcentaje de eficacia de cada acaricida, empleando la fórmula descrita por ^{Drummond (1973)}:

Con base en el porcentaje de eficacia del producto, se obtuvo el factor de resistencia al dividir la eficacia esperada (100) entre la eficacia obtenida con cada uno de los productos acaricidas (^{Díaz, 2016}).

Análisis de encuestas

La información de las encuestas arroja que el 91,67% de los predios evaluados tienen un tipo de producción doble propósito y el 8,33% es de cría, levante y ceba; predominando en el 83,33% de las producciones las razas mestizas, (Cruce Holstein X Gyr X Normando X Brahman) mientras en el otro 16,67% de las fincas están compuestas por animales Brahman blanco y Angus rojo.

En cuanto a la distribución geográfica, el 75% (nueve predios) se ubican en la zona de trópico medio, municipios de Cajamarca e Ibagué, entre 1240 y 1814 m.s.n.m., con temperatura media de 20 a 24°C, humedad relativa de 72 a 84% y precipitación anual máxima de 233 mm. El 25% (tres predios) se ubica en el trópico bajo, municipio de Espinal, a 600 m.s.n.m., con temperatura media de 28°C, humedad relativa de 82% y precipitación anual de 159 mm.

La estrategia de control acaricida desarrollada en las fincas contempla compuestos químicos como el fluazuron, usado en el 41,66% de los predios como único tratamiento de rutina (ubicados todos estos en Cajamarca); según manifiestan los ganaderos debido a la pérdida de efectividad de los otros acaricidas como el amitraz, el etión y la cipermetrina. La frecuencia con que se usa este producto de aplicación tópica va de tres a seis meses y en algunas de las fincas llevan hasta seis años utilizándolo, como se observa en la tabla 1. En el resto de las fincas, 58,34%, ubicadas en Ibagué y El Espinal, se emplean baños de aspersión con etión, cipermetrina y amitraz, aplicándolos con intervalos menores a las tres semanas, difiriendo de la recomendación técnica para el control de R. microplus de bañar cada 21 días como mínimo, y rotando los productos de un baño al otro, prácticas que conllevan a la baja eficacia expresada por los ganaderos y que se origina por la alta presión de selección de garrapatas con características genotípicas de baja susceptibilidad hacia estos compuestos.

En cuanto a la ivermectina, se utiliza en el 41,7% de las fincas, todas las evaluadas en El Espinal y dos en Ibagué, a la dosis recomendada por el fabricante. La tabla 1 sintetiza la información obtenida en cada una de las fincas, así como la frecuencia de uso de los acaricias, la rotación y el historial de uso de los cuatros compuestos evaluados.

En ninguno de los predios analizados se realiza rotación con otros productos acaricidas y se evidencia que en todas las fincas usan solo químicos como estrategia de control de garrapatas. En la tabla 1 se evidencia que tanto en las fincas de trópico bajo como las de trópico medio donde se realiza control con cipermetrina, etión y amitraz, la frecuencia de uso es alta a excepción de los predios 1 (Ibagué) y 9 (Espinal).

Tabla 1 Encuesta evaluación previa de las prácticas de manejo en los predios analizados. 

Fuente: Original de los autores.

Por otro lado, cuatro de las doce fincas han usado los químicos acaricidas durante menos de cinco años en Cajamarca y El Espinal, sin embargo los predios pertenecientes a Cajamarca se usa un producto diferente a los evaluados en el presente estudio. Para un correcto uso de los baños por aspersión se recomienda rociar los animales siguiendo un orden y sosteniendo la boquilla aspersora de 15 a 30 cm de distancia del animal, el cual se debe bañar con una cantidad mínima (adultos 6 litros, terneros 4 litros, estos últimos a partir de los 3 meses de edad); con periodicidad de 30 a 60 días de intervalos entre baños según el nivel de infestación (^{Rodríguez-Vivas et al., 2006}).

Evaluación de acaricidas

Según la tabla 2, con el organofosforado en el 25% de las fincas las poblaciones de R. microplus presentan disminución en el total de su descendencia con relación al grupo control, con reducción promedio del 98,96% en el número de larvas generadas, lo cual incidirá directamente en el nivel de infestación de los animales. Para el caso de la amidina el 16,66% de los predios presentó una disminución promedio de 92,94%. En cuanto al piretoride solo en un predio que representa el 8,33% del total de las fincas evaluadas logró una reducción del 90,41%. En contraste, la lactona macrocíclica consiguió en el 66,66% de los predios una reducción promedio de 96,83% representado el acaricida que mejor comportamiento tuvo para controlar la eficacia reproductiva de los especímenes analizados.

Tabla 2 Comparación entre la eficacia reproductiva ER de R. microplus para los cuatro tratamientos en las 12 fincas evaluadas con respecto al control. 

ER: Eficacia reproductiva.

Fuente: Original de los autores.

De otra forma, el amitraz reflejó una reducción de más del 90% en la eficacia reproductiva de las poblaciones de R. microplus solo en Ibagué, al igual que la cipermetrina y el etión. Mientras que la ivermectina tuvo gran incidencia en este mismo municipio y en Cajamarca con valores que superaban el 90%; siendo el acaricida más efectivo en el ecosistema de trópico medio. Para el caso de los predios ubicados en el trópico bajo el organofosforado y la lactona macrocíclica fueron los plaguicidas de mejor rendimiento con un promedio de control de 76,83% y 75,36% respectivamente.

Los cuatro acaricidas evaluados incidieron negativamente en los parámetros reproductivos de las poblaciones de R. microplus, afectando la ovoposición de las garrapatas, el porcentaje de eclosión y la estimación reproductiva, evidenciando valores más bajos que los registrados en el grupo control, reflejando el efecto de estos compuestos sobre las teleoginas. Sin embargo, cipermetrina y el amitraz fueron los acaricidas con el rendimiento más bajo para controlar la eficacia reproductiva de las poblaciones de los especímenes analizadas.

Por otro lado, durante la evaluación de la ovoposición y el pesaje de la masa de huevos, se evidenciaron diferencias morfológicas en la estructura de estos observándose deformidad de la silueta de estos, principalmente para los especímenes tratados con ivermectina.

La eficacia de los acaricidas evaluados presentó variaciones por finca y por municipio. La cipermetrina tuvo un porcentaje de eficacia bajo con relación a los demás acaricidas, aunque mostró un comportamiento aceptable en un solo predio, el cual representa al 8,33% del total de las fincas analizadas reportando un valor de 90% de eficacia, de modo que en el 91,66% de los predios el piretroide fue ineficaz, teniendo en cuenta que según la ^{FAO (2004)} la eficacia mínima aceptada internacionalmente debe ser a partir del 90% (Tabla 3).

Para el caso del amitraz se obtuvo un valor por encima del 90% de eficacia en el 16,66% de los predios, mientras que el etión reportó este comportamiento en el 25% de las fincas, contrastando con la ivermectina, el cual refleja una eficacia alta en el 66,66%.

De otra forma en el 33,33% de los predios el amitraz presentó un rango de eficacia de 20-40%, mientras que en el 25% presentó un rango de 41-60% y y el 8,33% de las fincas estuvo en un rango de 61-89%.

En cuanto a la cipermetrina el 50% de las ganaderías analizadas presentó un rango de eficacia de 20-40%, el 8,33% obtuvo una valor de 41-60% y el 25% estuvo por debajo del 20%.

Para el caso del etión el 25% de las fincas reflejó una eficacia entre 40-60%, el 16,66% tiene un rango de 61-80% mientras que el 25% obtuvo un valor de 81-89% (Tabla 3).

Tabla 3 Eficacia de control en R. microplus colectados en 12 fincas de Ibagué, Cajamarca y El Espinal. 

Fuente: Original de los autores.

En contraste, la ivermectina evidenció en el 33,33% de los predios un porcentaje de eficacia que va desde 71% hasta el 89%.

Por otro lado, el 77,77% de los predios ubicados en trópico medio presentaron multiresistencia y el 100% de las fincas de trópico bajo evidenció resistencia a todos los compuestos evaluados. Situación que coincide con los comentarios de los productores quienes afirman que los químicos analizados no sirven para controlar garrapatas, denotando pérdida de eficacia de estos compuestos en esas fincas.

Los resultados del presente estudio son similares a los publicados por ^{Díaz (2016)}, donde la evaluación realizada en dos fincas del norte del Tolima detectó la pérdida de eficacia de amitraz con niveles de 51,95% y 76,96%, y de la cipermetrina con 87,85% y 93,5%, denotando una disminución en la población de individuos susceptibles a estos acarcicidas. Otros estudios realizados en Ibagué igualmente demuestran un nivel de resistencia a piretroides del 92,1% y a organofosforados del 71,1% (^{Díaz & Vallejo, 2013}, ²⁰¹⁴).

Un trabajo realizado en las regiones naturales de la Orinoquía, Pacifico, Llanura del Caribe, Amazonia y región Andina donde se analizaron poblaciones de R. microplus de 71 ganaderías, mostró niveles altos de resistencia, encontrando que el 97% de los hatos ganaderos muestreados presentó resistencia al uso de amitraz, mientras que el 52% la presentó al uso de etión, principalmente en los departamentos de Santander, Cundinamarca, Antioquia, Tolima, Quindío, Caldas, Huila y Boyacá, evidenciando la pérdida de la eficacia de este tipo de acaricidas, para el control de garrapatas (^{Araque, 2014}). Otro estudio hecho con poblaciones de R. microplus en Arauca, Córdoba, Meta y Valle del Cauca detectó resistencia hacia cipermetrina y amitraz con niveles de eficacia inferiores al 50% y porcentajes de eficacia entre el 10% y 20%. (^{Villar et al., 2016}) Así también evaluaron amitraz cuya eficacia no superó el 50%. Otros estudios con resultados publicados en Ibagué demuestran resistencia hacia piretroides de hasta el 92,1% y hacia organofosforados del 71,1% (^{Díaz & vallejo, 2013}, ²⁰¹⁴).

Estudios recientes en cuatro fincas de Antioquia han mostrado que para la cipermetrina los valores de eficacia fueron menores del 20%, e incluso del 0% en dos de ellas (^{Puerta et al., 2015}). Pero no solo en Colombia se reporta la presencia de resistencia a acaricidas en esta especie de ectoparásito. La resistencia acaricida de R. microplus, es una problemática detectada a nivel mundial donde se ha registrado resistencia multiple en diferentes niveles, como se reporta recientemente en Brasil y México (^{Fernández-Salas et al; 2012}; ^{Pohl et al., 2012}; ^{Lovis et al., 2013}; ^{Miller et al., 2013}).

Todos estos trabajos demuestran que en Colombia la resistencia de R. microplus hacia los acaricidas no es un fenomeno nuevo y se ha manifestado en diversas regiones del pais. La quimioresistencia puede originarse debido a la incorrecta utilización de los compuestos químicos empleados para el control de la garrapata, ya sea por el uso continuo y prolongado de un solo tipo de acaricida, por las altas frecuencias de aplicación de baños, por la inadecuada preparación de las soluciones con frecuente incremento de la dosis recomendada por el fabricante o por la deficiente aplicación impidiendo que la solución garrapaticida cubra totalmente el cuerpo del bovino (^{Díaz, 2012}).

Como resultado del uso indiscriminado de estos cuatro acaricidas etión, cipermetrina, amitraz e ivermectina, en el control de altas infestaciones de garrapatas en bovinos, la resistencia a químicos de R. microplus se ha convertido en uno de los más grandes retos y una causa de preocupación por la producción ganadera donde este ácaro es endémico o en áreas propensas a la invasión por estas especies de ectoparásitos perjudiciales (^{Reck et al., 2014}; ^{Raynal, 2013}; ^{López-Arias et al., 2015}).