Introducción
Las frutas son un segmento importante de consumo en el mundo entero; se ha establecido una relación entre el consumo de frutas y la reducción de riesgos de padecer enfermedades crónicas, incluyendo obesidad y diabetes (Mozaffarian, 2016), asociado al elevado contenido de sustancias antioxidantes, como la vitamina C, carotenoides, minerales y polifenoles.
Alrededor de 140 millones de toneladas de 3000 tipos de frutas tropicales son producidas anualmente (Ma, Li, & Zhang, 2016), en Latinoamérica la producción de las principales frutas tropicales alcanzó 62 millones de toneladas (FAO, 2010) y Colombia es considerado uno de los principales países productores de frutas frescas del mundo. Una de estas frutas es la pitahaya amarilla que es una cactácea proveniente de América subtropical (Torres Valenzuela, Ayala-Aponte, & Serna, 2016) y es catalogada como una de las 10 frutas más promisorias para exportación en Colombia (Ayala Aponte, Giraldo Cuartas, & Serna Cock, 2010).
La pitahaya amarilla es popular en Europa y Estados Unidos por su apariencia, sabor exótico y composición química (Serna Cock, Torres Valenzuela, & Ayala Aponte, 2013), en su composición tiene compuestos bioactivos o fitoquímicos que son sustancias derivadas del metabolismo secundario de los vegetales y tienen efecto benéfico para la salud humana (Meregalli et al., 2020) ; dentro de estos, se incluyen polifenoles (Torres Grisales, Melo Sabogal, Torres-Valenzuela, Serna-Jiménez, & Sanín Villarreal, 2017) y vitamina C (Serna Cock et al., 2013) que son compuestos con reconocida capacidad antioxidante. Trabajos previos del grupo de investigación han permitido cuantificar características funcionales como aceleración del peristaltismo, vitamina C, compuestos fenólicos y capacidad antioxidante en pulpa, semilla, cáscaras y tallos (Torres Grisales et al., 2017).
De manera tradicional, el consumo de esta fruta se hace en fresco, mínimamente procesada (Torres Valenzuela et al., 2016), conservas, y/o fruta deshidratada (Ayala Aponte et al., 2010). La parte comestible es el 60% de la fruta, la cáscara representa un tercio de su peso y es considerada en la industria como un residuo, que se descarta, con lo cual se generan problemas fitosanitarios y de manejo. Dentro de los componentes de estas cáscaras se resaltan compuestos fenólicos con alta capacidad antioxidantes y alta concentración de fibras y polisacáridos (De Mello et al., 2014).
Teniendo en cuenta los efectos que se han asociado al consumo de polifenoles, este subproducto puede ser sometido a métodos de extracción y purificación de biocomponentes. Sistemas de extracción soxhlet, reflujo, prensado en frío, maceración con disolventes orgánicos han sido técnicas empleadas para la extracción de compuestos fenólicos de diversas fuentes, sin embargo esas técnicas convencionales tienen limitaciones relacionadas con el alto tiempo de extracción, bajo rendimiento y alteración de los compuestos de interés (Valadez-Carmona et al., 2018). Recientes estudios han evaluado técnicas capaces de superar estas limitaciones como son la extracción con fluidos supercríticos (Valadez-Carmona et al., 2018), extracción asistida con alto voltaje (Boussetta & Vorobiev, 2014), procesamiento por altas presiones hidrostáticas, radiación gamma y ultrasonido (Briones-Labarca et al., 2015. Estos son métodos ambientalmente amigables y eficientes energéticamente, que mejoran los procesos de transferencia de masa en tejidos vegetales y animales.
La extracción asistida por ultrasonido es considerada una alternativa para la extracción de ingredientes activos de las plantas por la alta eficiencia, bajo requerimiento de energía y bajo consumo de disolventes y ha sido usada para la extracción de compuestos bioactivos (Briones-Labarca et al., 2015). La sonicación genera formación y colapso de burbujas microscópicas que liberan grandes cantidades de energía en forma de calor, presión y esfuerzo mecánico (Briones-Labarca et al., 2015); de esta manera se genera microturbulencia e incremento de la difusión (Shirsath et al., 2017).
Esta técnica ha sido empleada para la extracción de curcumina (Shirsath et al., 2017), colágeno (Zou et al., 2017) y lípidos en lino (Metherel et al., 2009), antioxidantes de papaya (Briones-Labarca et al., 2015), flavonoides, entre otros. Las condiciones de proceso difieren en función del compuesto bioactivo, de la materia prima y de los disolventes empleados.
Por lo anterior, el objetivo de este trabajo fue evaluar las condiciones de secado de la cáscara de pitahaya y optimizar el proceso de extracción de polifenoles con el método de sonicación.
Materiales y métodos
Material vegetal
Se trabajó con pitahaya amarilla (Selenicereus megalanthus Cactaceae) de tercera calidad en estado de madurez cuatro correspondiente a la clasificación de la norma NTC 3554 comprada en un mercado local de la ciudad de Armenia (Q) con la finalidad de generar una alternativa de valor agregado a este tipo de productos. Se realizó un proceso de limpieza y desinfección de los frutos, mediante un lavado con agua potable e inmersión durante 10 minutos en una solución a 2,50 mL/L de Citrosan (Diken International, México). Los frutos se dejaron secar durante 10 minutos a temperatura ambiente. Posteriormente se separó manualmente la pulpa de la cáscara de la pitahaya.
Diseño experimental
Se empleó un diseño secuencial de tres fases. En la primera fase se evaluó el efecto del tiempo de secado sobre el contenido de humedad, actividad de agua y pérdida de peso, utilizando un diseño aleatorio unifactorial. El mejor tiempo de secado fue utilizado para la segunda fase, en la cual se empleó un diseño de superficie de respuesta donde se evaluaron el efecto del tiempo y potencia de sonicación, adicionalmente se tomó un punto de control en sistema de extracción soxhlet (Electrónica y Química, Colombia).
Finalmente se evaluó el efecto de las condiciones del ultrasonido sobre los biocomponentes extraídos (polifenoles y medición de la capacidad antioxidante). En la Tabla 1 se presentan las condiciones evaluadas y la codificación empleada.
Tratamiento | Tiempo (min) | Potencia (%) | Variables codificadas | ||||
---|---|---|---|---|---|---|---|
X1 | X2 | X1 2 | X2 2 | X1X2 | |||
1 | 22,50 | 40 | -1 | 0 | 1 | 0 | 0 |
2 | 33,10 | 60 | 0 | 1 | 0 | 1 | 0 |
3 | 15 | 50 | -1,414 | -1,414 | 1,999 | 1,999 | 1,999 |
4 | 22,50 | 80 | 1 | 0 | 1 | 0 | 0 |
5 | 15 | 70 | 1,414 | -1,414 | 1,999 | 1,999 | -1,999 |
6 | 22,50 | 60 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
7 | 22,50 | 60 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
8 | 22,50 | 60 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
9 | 30 | 70 | 1,414 | 1,414 | 1,999 | 1,999 | 1,999 |
10 | 22,50 | 60 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
11 | 22,50 | 60 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
12 | 30 | 50 | -1,414 | 1,414 | 1,999 | 1,999 | -1,999 |
13 | 11,90 | 60 | 0 | -1 | 0 | 1 | 0 |
Fuente: elaborada por los autores.
Proceso de secado de cáscaras de pitahaya
Las cáscaras se cortaron en fracciones de 6 x 6 mm, se colocaron en una bandeja la cual se llenó completamente, de manera que sólo quedara expuesta a la corriente de aire de secado la superficie de las cáscaras. El secado se realizó en una estufa de circulación forzada a una temperatura constante de 60°C (UT6 120, Binder, USA). Se realizó seguimiento de pérdida de peso, contenido de humedad y actividad de agua durante el secado a tiempo 0, 5, 10, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 210, 270, 300, 360, 420, 450 y 480 minutos. La pérdida de peso se midió con una balanza analítica (Pionner PA 313 - Ohaus Corp, USA). Se calculó la humedad libre total y humedad libre empleando la ecuación 1 y 2 respectivamente
Donde:
Xt = Humedad libre total (g totales de H2O/g totales del sólido seco)
Ws = Peso del sólido húmedo (g totales de H2O + g totales del sólido seco)
W = Peso del sólido seco (g totales del sólido seco)
X = Humedad libre (g de H2O libre/g de sólido seco)
X* = Humedad de equilibrio (g de sólido seco)
El contenido de humedad se determinó mediante una balanza de humedad (OHAUS Corp., USA) y la actividad de agua por el método AOAC 978.18 (AOAC, 2000) empleando un medidor de actividad de agua fundamentado en el método de punto de rocío (Aqualab Lite 7614AQUALITE - Decagon DevicesInc, USA).
Extracción de compuestos bioactivos con asistencia por ultrasonido
El proceso asistido por ultrasonido se realizó con etanol (Scientific Products) al 96% y una relación muestra/disolvente de 1:1 p/p, a temperatura de 25 °C en un baño de ultrasonido, conocido como sonicación indirecta (Elmasonic P30H, Alemania) a 37 kHz, potencia nominal de 370 W y que van desde 40 a 80% y tiempo de sonicación entre 11,90 y 33,10. Adicionalmente se realizó una extracción con el método Soxhlet con la misma relación muestra/disolvente, esta extracción corresponde al control.
Cuantificación de compuestos fenólicos y capacidad antioxidante
La cuantificación de polifenoles totales se realizó siguiendo el método espectrofotométrico de Folin-Ciocalteu reportado por Torres (2017) 0,25mL del reactivo Folin-Ciocalteu (Merck, Alemania) y 3,25 mL de carbonato de sodio al 20% se llevaron a oscuridad por dos horas, luego se registró la absorbancia a 765 nm utilizando un espectrofotometro UV-Vis (Thermoscientific, USA) los resultados se expresaron en mg de ácido galico por 100 gramos de muestra seca. La capacidad antioxidante se determinó con el método espectrofotométrico del catión radical de ABTS (2,2'-azinobis, 3-etilbenzotiazolina-6-sulfonato) y la metodología descrita por Torres (2017) en la que se produjo un catión radical ABTS • + que produjo directamente un cromóforo ABTS verde-azul a través de la reacción entre ABTS • + y persulfato de potasio, que presenta una absorción máxima a 734 nm. El catión radical ABTS • + se produjo a partir de una reacción entre una solución 7 mM de ABTS (Merck, Alemania) con persulfato de potasio (2,45 mM). La mezcla se llevó a la oscuridad durante 16 horas, luego se diluyó usando etanol (Emsure®ACS, ISO, Reag. Ph. EUr) hasta lograr una absorbancia de 0,715 + 0,005 a 732 nm. Usando un espectrofotómetro UV-Vis (Thermoscientific, USA)
El porcentaje de capacidad antioxidante se calculó con la Ecuación 3.
Donde:
%A.A = Porcentaje de actividad antioxidante
AbsABTS = Absorbancia del reactivo ABTS
Absmuestra = Absorbancia de la muestra
Los resultados de actividad antioxidante se expresaron en Capacidad Antioxidante Equivalente de Trolox (TEAC) a partir de una regresión lineal.
Análisis estadístico
Los ensayos que no fueron del diseño experimental se realizaron por triplicado y los análisis estadísticos se realizaron empleando el software Minitab® 16.1.0.
Se realizó adicionalmente modelación estadística del contenido de polifenoles totales y porcentaje de capacidad antioxidante, con el fin de encontrar una ecuación que represente el comportamiento de estas variables en función del tiempo y potencia de sonicación. El modelo propuesto incluye los efectos independientes lineales y cuadráticos y efecto de interacción:
Donde:
β0 = Valor Constante
β1= Potencia
β2= Tiempo
X= variables codificadas
El cálculo de las constantes del modelo se realizó mediante regresión matricial, empleando el software Matlab 2016.
Resultados
En el proceso de secado intervienen dos factores importantes, uno de ellos es la transmisión de calor donde se suministra el calor latente de evaporación necesario y el otro es el movimiento del agua o del vapor de agua a través del producto alimenticio y su separación del mismo, como se observa en la Gráfica 1, se presentan diferencias en el peso en función del tiempo de secado, lo que indica que hay una pérdida de agua en el producto. Se tuvo un peso constante de 23,77 g después de 480 minutos de secado.
En la Gráfica 2 se puede observar la tendencia de la reducción de la humedad libre en función del tiempo, se observa el mismo comportamiento, que está asociado con la disminución del agua libre por efecto de un proceso de evaporación. En el inicio de la curva existe una reducción de humedad de forma lineal, aproximadamente por las dos primeras horas, es en este intervalo de tiempo donde se desarrolla el periodo de velocidad constante. Luego de esta etapa, se observa disminución de humedad con menor rapidez, es aquí donde se va a desarrollar la mayor parte del secado, es decir el periodo de velocidad decreciente. Al final del proceso de secado, se eliminó toda el agua libre en 7,50 horas.
Las muestras de cáscara de pitahaya amarilla fresca presentaron un contenido de humedad promedio de 84,16 ± 0,046 (Kg agua/Kg material seco) y una aw promedio de 0,931 ± 0,002; mientras que las muestras secas presentaron un contenido de humedad promedio de 8,59% ± 0,076 (Kg agua/Kg material seco) y una aw promedio de 0,175 ± 0,04.
El descenso de ambos componentes se debe a que mediante un proceso de secado el contenido de humedad y actividad de agua disminuyen, lo que permite inhibir el crecimiento de microorganismos. El objetivo de realizar el proceso de secado es disminuir el contenido de humedad y valores de aw por debajo de 0,6 para no permitir el crecimiento de bacterias y hongos (Barajas Ortiz, 2011). Por lo tanto, las condiciones de secado evaluadas permiten acondicionar este subproducto para que sea estable en almacenamiento y pueda ser aprovechado para otros usos.
Extracción de compuestos bioactivos asistidos por ultrasonido
En la Tabla 2 se presentan los resultados de polifenoles totales, capacidad antioxidante (%, TEAC) en función del tiempo y potencia de sonicación. En todos los casos, se encontró un elevado contenido de compuestos fenólicos y capacidad antioxidante. No se presentaron diferencias significativas entre los tratamientos (p>0,05) pero si diferencias significativas con el control (datos no mostrados).
Tratamientos | % Capacidad Antioxidante | Equivalente Trolox (μM/g) | Polifenoles totales (mg/L) | |
---|---|---|---|---|
Potencia (%) | Tiempo (minutos) | |||
40 | 22,5 | 89,25 | 95,94 | 566,78 |
60 | 33,1 | 97,77 | 105,01 | 827,84 |
50 | 15 | 98,58 | 105,81 | 876,78 |
80 | 22,5 | 96,96 | 104,14 | 808,89 |
70 | 15 | 97,77 | 105,01 | 810,47 |
60 | 22,5 | 98,38 | 105,65 | 785,21 |
60 | 22,5 | 88,84 | 95,51 | 814,15 |
60 | 22,5 | 97,16 | 104,36 | 703,63 |
70 | 30 | 93,10 | 100,04 | 835,21 |
60 | 22,5 | 94,73 | 101,77 | 691,52 |
60 | 22,5 | 96,35 | 103,50 | 973,10 |
50 | 30 | 90,87 | 97,67 | 822,05 |
60 | 11,9 | 99,59 | 106,95 | 813,63 |
Fuente: elaborada por los autores.
El tratamiento que mayor porcentaje de actividad antioxidante presentó fue empleando una extracción de 11,90 minutos y 60% de potencia en el ultrasonido.
La mayor cantidad de polifenoles totales de la cáscara de pitahaya amarilla utilizando el ultrasonido como técnica de extracción se obtuvo utilizando tiempos de 22,50 minutos y potencias de 60% con un valor de 973,10 mg/L.
La ecuación que describe el modelo matemático para el contenido de polifenoles totales y el porcentaje de capacidad antioxidante de la cáscara de pitahaya amarilla en función de las dos variables estudiadas se presenta en la ecuación 4 y 5.
Ecuación 4. Modelo matemático del porcentaje de capacidad antioxidante
Ecuación 5. Modelo matemático del contenido de polifenoles totales
Donde:
P = Potencia
T = Tiempo
Pt = interacción entre la potencia y el tiempo
En ambos modelos matemáticos se puede observar que los principales efectos lo ejercen el tiempo y la potencia, donde la potencia tiene un efecto creciente y el tiempo un efecto decreciente al momento de realizar la extracción de estos biocomponentes. Esta modelación permite predecir cuál es el comportamiento de estas variables.
Los resultados del efecto de la potencia y el tiempo de ultrasonicación sobre el contenido de polifenoles y capacidad antioxidante se muestran en la gráfica 3 , donde se muestra que utilizando potencias altas y tiempos cortos o prolongados se obtiene un mayor contenido de polifenoles totales, mientras que utilizando tiempos potencias altas y tiempos cortos se obtiene un mayor porcentaje de capacidad antioxidante en las muestras de cáscara de pitahaya amarilla.
El incremento del tiempo generó un efecto negativo al momento de extraer antioxidantes y polifenoles totales, si se disminuye esta variable se obtiene una mayor extracción de éstos. Comportamiento opuesto se encontró con la potencia, sin embargo, las diferencias no son estadísticamente significativas (p>0,05), es decir que es indiferente si se utiliza un tiempo menor o mayor de extracción, por lo tanto, es recomendable utilizar un tiempo menor debido a que se disminuyen costos y tiempo de operación.
Los resultados concuerdan con la literatura, donde el tiempo puede ser una variable que puede afectar la extracción de componentes bioactivos, pues una elevada exposición a la ultrasonicación puede influir en la calidad y el rendimiento de extracción del compuesto de interés, debido a que al dejar las muestras sonicando, el fenómeno de cavitación puede incrementar la temperatura y en consecuencia permitirá la degradación del material vegetal (Rodríguez Riera, 2014). Cuastumal Canacuan, Valencia Murillo, and Ordóñez Santos (2016) evaluaron el efecto de diferentes métodos de calentamiento sobre la estabilidad de compuestos bioactivos y reportan que estos se ven afectados en diferente medida, dependiendo del método de calentamiento.
El tiempo estimado para la extracción dependerá del tipo, la estructura de la pared celular del material vegetal, del grado de penetración del disolvente en el material vegetal y de la resistencia de la masa de los constituyentes solubles a ser transferidos por difusión (Rodríguez Riera, 2014).
El proceso de asistencia con ultrasonido generó un incremento en los polifenoles extraídos, pasando de 509,94 mg/L de ácido gálico en la extracción soxhlet a 970 mg/mL de ácido gálico con sonicación indirecta. Asociado a mayor cantidad de compuestos fenólicos, se obtuvo un incremento en la cantidad de compuestos fenólicos en un 77%. Los mejores resultados se obtuvieron a partir de la extracción por ultrasonido, lo cual pudo presentarse debido a que la extracción ocurre a una menor temperatura y tiempo de reacción, respecto a los métodos tradicionales, con beneficios en la pureza y los rendimientos del compuesto extraído (Rodríguez Riera, 2014).
Adicional al incremento en la extracción, se generó una disminución del 99,17% del tiempo de extracción en comparación con el control, lo que conlleva a reducir costos, minimizar el impacto ambiental y aumentar rendimientos.
Discusión
El secado es uno de los más antiguos y comunes métodos usados para la preservación de alimentos (Hashim, Daniel, & Rahaman, 2014) y el secado convectivo con aire es el método más empleado para el secado de materiales agrícolas (Motevali, Minaei, Banakar, Ghobadian, & Darvishi, 2014; Nuñez Vega, Sturm, & Hofacker, 2016), en este proceso el aire calienta la superficie del producto, produciendo la evaporación del agua y un incremento en la temperatura, como consecuencia dentro del alimento se genera una conducción de calor y difusión del agua. Debido a la baja conductividad térmica de los alimentos (Motevali et al., 2014), el uso del aire caliente para remover el agua es costoso, pero es una de las tecnologías más empleadas en la industria.
La deshidratación de esta materia prima, se genera por desorción multimolecular y condensación capilar (Quirumbay Suárez, 2009). En el cálculo de la velocidad de secado (datos no presentados) no se encontró un periodo de velocidad constante, esto pudo presentarse debido a que los materiales coloidales y fibrosos como vegetales y otros productos alimenticios se contraen, cambiando su estructura y generando una deformación en el sólido.
Según Quirumbay Suárez (2009), existen diferentes factores que afectan la velocidad de secado, entre esas se encuentra la naturaleza del material (composición física y química, contenido de humedad, etc.), tamaño, forma y arreglo de las muestras, temperatura de bulbo húmedo, humedad relativa, presión parcial de vapor de agua en el aire, temperatura del aire y la velocidad del aire, por lo tanto las cáscaras de pitahaya amarilla sufrieron una deformación, lo que género que su área no fuera la misma en todas las mediciones afectando la velocidad de secado.
Respecto a la extracción de compuestos fenólicos, los resultados concuerdan con Khan, Abert-Vian, Fabiano-Tixier, Dangles, and Chemat (2010) donde el máximo contenido de fenoles totales se alcanzó con 15 minutos de extracción en el ultrasonido mientras que por soxhlet fue con 60 minutos. En otro estudio el rendimiento de la extracción con ultrasonido se incrementa de 3 a 5 veces con diferentes disolventes (Sivakumar V, 2007). Según Robles-Ozuna (2012) el incremento en la extracción de compuestos por medio de la técnica de ultrasonido se atribuye a la presión de las ondas propagadas que resultan en el fenómeno de cavitación; la elevada fuerza de cizalla incrementa la transferencia de masas de los extractantes debido a la implosión de las burbujas generadas que provocan macroturbulencia y la colisión de interpartículas a alta velocidad y a la perturbación en los microporos de las partículas de la biomasa que acelera difusión por remolino y la interna. La capacidad antioxidante expresada como Trolox Equivalente para la muestras obtenidas luego del tratamiento de ultrasonido variaron entre 94 |μM/g y 106 μM/g superior a lo reportado por Contreras-Calderón, Calderón-Jaimes, Guerra-Hernández, and García-Villanova (2011), quienes evaluaron la capacidad antioxidante de la cáscara de 14 frutas y encontraron menor capacidad antioxidante en 12 de los productos evaluados, los únicos productos que superan el valor de la cáscara de pitahaya son cáscara de algarrobo y sapote.
Estos resultados son superiores a los reportados por Beltrán Orozco (2009) en donde el contenido fenólico en pitahaya roja fue de 10,25 mg/L± 0,30 y en pitahaya amarilla de 17,04 mg/L± 0,30, demostrando así mejores resultados en la cáscara de pitahaya amarilla. Esta variación puede ser generada por efecto de la asistencia por ultrasonido demostrando que este método ejerce un efecto al momento de obtener este biocomponente, además evidenciando que a partir de subproductos que provienen de la etapa de postcosecha o transformación en la industria de alimentos se puede generar un aprovechamiento (De Mello et al., 2014).
Estos resultados demuestran que existe un alto potencial para la utilización de residuos agroindustriales como lo reporta Daza Ramírez (2015) en su estudio sobre la evaluación de la capacidad antioxidante de frutas cultivadas en el departamento del Tolima y sus residuos agroindustriales. En un estudio realizado por Tovar del Rio (2013) sobre la determinación de la actividad antioxidante por DPPH y ABTS de 30 plantas recolectadas en la ecoregión cafetera se observa un porcentaje máximo de capacidad antioxidante del 39%, mientras que en los extractos de la cáscara de pitahaya, el porcentaje de capacidad antioxidante es del 99% lo cual refleja una gran alternativa de valor agregado para este subproducto en la industria alimentaria, farmacéutica, cosmética, entre otras.
Conclusión
La extracción asistida por ultrasonido de biocomponentes en cáscara de pitahaya amarilla es una alternativa de aprovechamiento a un subproducto, éstas, pueden ser sometidas a un proceso de secado con condiciones controladas de temperatura con la finalidad de disminuir las reacciones bioquímicas y microbiológicas de deterioro que pueden afectar los biocomponentes. Dentro de esta investigación se encontró que las cáscaras son una fuente potencial de compuestos bioactivos encontrando concentraciones de polifenoles de 973,10 mg/L que pueden ser extraídos por ultrasonido a 222 W de potencia nominal, 35kHz de frecuencia y 22 minutos y con una capacidad antioxidante superior al 90%, generando una disminución significativa en el tiempo de proceso en comparación con técnicas tradicionales. Es así como en el marco de las biorrefinerias y economía circular la extracción de biocomponentes en cáscaras de pitahaya puede ser una alternativa de alto valor agregado, sin embargo, es necesario evaluar procesos de concentración y estabilización para que sean usados como materia prima en industrias como la farmaceútica, cosmética o nutraceútica.